阪崎肠杆菌(又称阪崎氏肠杆菌)是肠杆菌科的一种,1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症,死亡率高达50%以上。微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源,但许多病例报告表明婴儿配方粉是发现的主要感染渠道。
关于阪崎肠杆菌,北京清析技术研究院可提供环介导等温扩增测定,分离鉴定测定,对肠道菌群调节作用测定,LAMP测定,PCR测定等检测项目。北京清析技术研究院可对婴幼儿乳粉,含乳饮料,奶粉,茶饮料,微胶囊,乳制品等进行阪崎肠杆菌的检测。
检测方法
采用单引物等温扩增方法,以SYBER GreenⅡ为荧光染料,实时荧光检测仪检测扩增的实时荧光信号,即以实时荧光定量PCR检测扩增信号,具体过程包括如下步骤:
(1)取含阪崎肠杆菌的待检样品,提取基因组DNA;
(2)建立阪崎肠杆菌的实时荧光单引物等温扩增的25μL反应体系:其中RNA/DNA组合引物为2.8μmol/L、Blocker为0.2 μmol/L、Mg2+为5.0mmol/L、dNTPs为1.0 mmol/L、BST DNA聚合酶为20U、RNase H酶为2.5U、RNaseInhibitor为32U、SYBER GreenⅡ为0.3μL,其余用灭菌DEPC水补足体系;所述SYBERGreenⅡ为300倍稀释;将DNA模板、组合引物、Blocker及反应缓冲液的混合液经99℃,90s处理后降温至60℃,迅速加入RNase H和BstDNA聚合酶,在实时荧光定量PCR仪上55℃反应40min,反应过程中实时监测荧光信号;
(3)检测分析:分析检测数据;所述引物选用GGUCCGAC-TCACGAAAGCC5’端8nt碱基为RNA序列,3’端11nt碱基为DNA序列;Blocker选用CGACGACCACGACA,3’端用生物素修饰,中间随机加上两个IXNA修饰。本检测方法可用于婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌检测。
检测标准
1、DB41/T 1590-2018 饲料中阪崎肠杆菌的检测EMA-PCR法
2、TCVN 7850-2008 乳和乳制品.阪崎肠杆菌的检测
3、GOST ISO/TS 22964-2013 牛奶和奶制品阪崎肠杆菌检测
4、IDF/RM 210-2006 牛奶和奶制品-阪崎肠杆菌的检测
5、GB/T 4789.40-2008食品卫生微生物学检验.阪崎肠杆菌检验
6、DBS13/ 003-2015 食品安全地方标准阪崎肠杆菌和沙门氏菌检测
7、SN/T 5368.1-2022 商品化试剂盒检测方法克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌) 方法一
8、BS EN ISO 22964:2017 食物链的微生物学.检测阪崎肠杆菌属的水平法
9、GB 4789.40-2010食品安全国家标准食品微生物学检验.阪崎肠杆菌检验
10、SN/T 1632.4-2022出口乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检测方法 第4部分:PCR-CRISPR法