乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LD或LDH,EC1.1.1.27)是一类NAD依赖性激酶,有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基,可构成6种四聚体同工酶。动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体,常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶(LDH1-5),C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。
乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白,分子量为135-140kD,是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以肾脏含量高,是心肌和骨肌。红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
检测方法
常规的LDH测定方法包括等温电泳、酵素联合免疫吸附测定法(ELISA)、分光光度法、流式细胞术等。其中,分光光度法是常用的方法之一。分光光度法基于LDH催化的反应,根据NADH(辅酶NADH)的光学吸收特性来检测乳酸代谢反应的产物。具体步骤如下:
1、将待测样品和反应试剂混合,放置在恒温器中达到恒定温度。反应试剂包括含有乳酸的底物缓冲液、NADH、钠盐和乳酸脱氢酶。
2、立即开始检测反应物转化的动力学过程,以记录NADH吸收波长的变化情况。在该过程中,LDH催化乳酸的氧化还原反应,NADH被还原生成NAD+,将NADH浓度减少,使得其吸收能力下降,从而吸光值减小。
3、根据反应曲线上的数据,计算出LDH水平。
分光光度法的优点是测定精度高且适用于大量样品的处理,但因其需要设备和技术,对于医疗保健机构和实验室而言,装置和操作成本可能较高。一些因素也可能干扰LDH测定,例如红细胞和其他细胞成分的存在。
检测标准
1、YY/T 1241-2014 乳酸脱氢酶测定试剂(盒)
2、WST 361:2011 乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法
3、DB22/T 3164-20200~3天新生儿血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶MB参考区间
4、WS/T 361-2011乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法