谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽,由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成,存在于几乎身体的每一个细胞。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能,并具有抗氧化作用、整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为其活性基团(故常简写为G-SH),易与某些药物、毒素等结合,使其具有整合解毒作用。谷胱甘肽不仅可用于药物,更可作为功能性食品的基料,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽有还原型(G-SH)和氧化型(G-S-S-G)两种形式,在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多数。谷胱甘肽还原酶可以催化两型间的互变,该酶的辅酶还可以为磷酸戊糖旁路代谢提供的NADPH。
关于谷胱甘肽,北京清析技术研究院可提供结构检测,代谢产物检测,提取物检测,理化性质检测,分子量检测,含量测定,荧光检测,荧光探针检测,生物学作用检测,高效液相色谱-蒸发光散射检测定量分析,毛细管电泳-激光诱导荧光检测等检测项目。北京清析技术研究院可对猪肉谷胱甘肽,细胞内谷胱甘肽,大鼠心肌线粒体谷胱甘肽,小鼠肝组织砷形态及谷胱甘肽,百脉根谷胱甘肽等进行谷胱甘肽的检测。
检测方法
1. 埃尔曼(Ellman)法
这是常用的谷胱甘肽测定方法,其原理是谷胱甘肽在DTNB(二硝基苯磺酸)的作用下,生成具有黄色的DTNB-SH,通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
2. 弗斯特(Foster)法
这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力,即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力,通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
3. DTNB比色法
原理:DTNB与谷胱甘肽的巯基反应生成黄色的5 - 硫代 - 2 -硝基苯甲酸,在412 nm波长处有极大吸收峰,而DTNB在400nm以上几乎没有吸收峰。向含有谷胱甘肽的试样中加入少量的DTNB,将反应液在412nm处测定吸收值,根据吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量。
方法步骤:
1)DTNB贮存液配制:将0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)中形成DTNB贮存液。
2)DTNB分析液配制:将DTNB贮存液用0.5mol/L、pH8.0的Tris - HCl缓冲液稀释100倍,配成DTNB分析液,避光放置,现配现用。
3)操作步骤:取谷胱甘肽标准品溶液或待测样品溶液(0.1 ~ 3.0mol/L)0.5 mL,加入到1.5 mL浓度为0.15mol/L的NaOH溶液中,再加入3%的甲醛溶液05mL,在pH8.0、25℃下反应2 min,反应结束后,取反应液0.5mL加入DTNB分析液,在25℃下反应5 min,于波长412nm下测定吸收值。根据两者的吸光度,计算差值,代入标准曲线,计算出谷胱甘肽的含量。
4. 高效液相色谱法(HPLC)
这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽,通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。
5. 荧光光谱法
这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱,通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。
检测标准
1、JIS K 9509:1992 谷胱甘肽(还原型)