细胞粘附是指细胞通过细胞表面的特化分子相互作用并附着到邻近细胞的过程。这个过程可以通过细胞表面之间的直接接触(如细胞连接)或间接相互作用发生,其中细胞附着在周围的细胞外基质上,细胞外基质是一种凝胶状结构,含有细胞释放到它们之间的空间中的分子。细胞粘附发生于细胞粘附分子(CAM)与位于细胞表面的跨膜蛋白之间的相互作用。
关于细胞粘附,北京清析技术研究院可提供细胞粘附分子检测,细胞粘附实验,荧光检测,细胞粘附功能检测,细胞粘附率检测等检测项目。北京清析技术研究院可对上皮细胞,表皮细胞,可溶性细胞,白细胞,红细胞,巨噬细胞等进行细胞粘附的检测。
检测方法——荧光法
1、细胞接种
(1)将实验细胞进行处理,用胰酶消化后,用 PBS 洗涤后,收集到离心管中1 000 rpm、5 min 并用相应的细胞培养基重悬,制成细胞悬液。
(2)按每孔 5 × 104 细胞接种 96孔板(具体细胞接种数目依据细胞特性和实验目的进行调整,检测前对照组细胞数量达到 80~90%),建议设置 3~5个复孔。设立对照组、药物处理组、空白对照组。对照组即溶剂处理组,空白对照组为不含细胞且更换正常细胞培养基,其他处理一致。
(3)将细胞放 37 ℃ 培养箱孵育培养 24h,依照实验目的分别处理对照组和药物处理组,后进行荧光染色观察不同组别荧光强度。
2、粘附率检测
(1)工作液的配制,从冰箱取出荧光染色(钙黄绿素)试剂,加入 DMSO制成储存液。并按照所测样品用量加入粘附测定缓冲液制成工作液,储存液可以 -20 ℃ 下保存。
(2)取出细胞培养板,吸弃培养基。并用 PBS 洗涤 2~3次后,加入每孔加入 100 μL 钙黄绿素工作溶液,孵育培养 20~30 min 后,去除上清液后,加入 PBS 清洗细胞。
(3)用荧光酶标仪检测结果。Zui大激发波长 488 nm,Zui大发射波长分别为 520 nm。
(4)细胞粘附率计算。将各测试孔的荧光强度值减去空白孔(未加细胞孔)荧光强度值。各重复孔的荧光强度值取平均数。
细胞粘附率 =((F 药物处理细胞 - F 空白)/(F 对照细胞 - F空白))× 10 0%
检测标准
1、T/CAB 0063-2020 Ⅲ型胶原蛋白促进细胞粘附性测定分光光度法