植物总RNA的提取检测实验室

总RNA是指从组织中提取纯化所得的RNA，它包含了细胞中的全部RNA类型。总RNA包括mRNA、tRNA、rRNA等不同类型的RNA。其中，mRNA是主要的类型，具有编码蛋白质的功能，负责传递遗传信息。tRNA是转移RNA，参与氨基酸的转运和mRNA上的密码子匹配。rRNA是核糖体RNA，是蛋白质合成场所的核心组成部分。

关于植物总RNA的提取，北京清析技术研究院可提供植物总RNA的提取测定等检测项目。北京清析技术研究院可对八仙花，鹅掌楸，莲藕组织，非洲菊花瓣，石斛，南瓜，小麦叶片，棉花组织，百合花等进行植物总RNA的提取的检测。

植物总RNA提取方法——异硫氰酸胍法

(1)试剂

①异硫氰酸胍溶液:4mol/L 二异硫氰酸胍,25mmol/L柠檬酸钠(pH7.0),0.5%十二烷基肌氨酸钠,0.1mol/L 巯基乙醇。

②2mol/L NaAc(pH4.0):用经 DEPC处理过的水配制,高压灭菌。

③水饱和苯酚(pH3.5)。

(2)操作

①取两只50mL 离心管,各加入15mL异硫氰酸胍溶液,于冰上预冷。

②取5g新鲜的幼嫩植物组织放在研钵中加入液氮,迅速研磨成均匀的粉末。

③将粉末全部移入冰上预冷的离心管中,振荡离心管混合均匀,将离心管置冰上。

④加入2mol/L NaAc 1.5mL、水饱和酚15mL和氯仿/异醇3mL,每加一种试剂都轻轻摇晃离心管混合均匀,之后将离心管盖紧,倒转几次混合均匀,冰浴15min。

⑤4℃条件下15000离心力离心30min,将上层水相转移至另一干净的离心管中,向管中加入等体积的异丙醇,混匀,置一20℃冰箱冷冻1h。

⑥4℃条件下13000离心力离心25min,小心去除上清液,沉淀溶于5mL异硫氰酸胍溶液中(体积为第一次异硫氰酸胍溶液体积的1/3),再加入等体积的异丙醇,混匀后置20℃冰箱冷冻1h。

⑦4℃条件下13000离心力离心20min,沉淀用70%乙醇洗一遍,稍微晾干后,溶于适量体积(约500L)DEPC处理的水中。检测后分装,于-70℃低温条件下保存。

(3)说明

①提取时使用的所有玻璃器皿和离心管都要用0.5%的 DEPC溶液处理,37℃保温12h 以上,高压灭菌,枪头也需高压灭菌。以下各方法均同。

②该方法操作简便,可做多个样品,无需长时间氯化铯梯度离心,近年来已被许多实验室采用。

检测步骤

1.实验准备：将所有玻璃器皿于180℃下干烤4h;所有离心管、枪头用0.1%DEPC(焦炭酸二乙酯)浸泡2h,再用灭菌的双蒸水（SDW）冲洗，*后高压灭菌30min。

2.将新鲜小麦幼苗置研钵中，加入液氮研成细粉。加提取缓冲液浸提5min。每1.5mL离心管的适宜用量为0.2g材料，1.2mL提取缓冲液。

3.12000g，4℃离心15min（以下离心操作均同此步）。

4.加入1X体积的酚/氯仿/异戊醇振荡萃取，离心。

5.取上清液，用1X体积的氯仿/异戊醇重复萃取、离心一次。如两相界面上仍有蛋白等杂质，则重复此步骤，直至界面清晰为止。

6.用加样枪吸取上清转移至另一离心管中，量取体积。加1molL-1NaAc至终浓度为0.14mmolL-1,混匀，加0.7X体积无水乙醇，4℃放置，可见白色RNA絮状沉淀。

7.离心，用70%乙醇沉淀几次，每管用30-50μL双蒸水重悬浮沉淀用于检测。