Tm值，即熔解温度或解链温度，是指DNA双螺旋结构在热变性过程中紫外吸收值达到Zui大值一半时的温度。不同序列的DNA具有不同的Tm值，DNA中G-C碱基对的含量越高，Tm值也越高，二者之间呈正比例关系。在DNA变性（熔解）过程中，其紫外吸收（在260nm波长处）值会随着双螺旋结构的解开而增加，直至完全解体。
在引物设计或其他与核酸相关的实验中，准确计算Tm值是非常重要的。对于长度为25个核苷酸以下的引物，Tm值的计算公式为：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)。对于更长的寡聚核苷酸，Tm值的计算更为复杂，会考虑多种因素如碱基组成、引物长度和使用的缓冲液离子强度等。
关于Tm值，北京清析技术研究院可提供Tm值测定等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对寡聚物，小鼠DNA，烟草花叶病毒，鸡蛋蛋白，抗体，酶，大肠杆菌基因等进行Tm值检测。
检测步骤
1 . 用循环恒温装置测Tm
按操作规程打开紫外分光光度计预热20 min。设定循环恒温装置于25 ℃ ,进行光吸收的初步测定。若是自制DNA, 先于25 ℃测其A260 , 用标准氯化钠-柠檬酸溶液稀释至A260 =0.4。并注意使其终体积适合于比色杯( 1 ml或3 ml)。
以标准氯化钠-柠檬酸溶液调整260 nm下光吸收零点。然后将装有待测的稀释DNA 溶液的比色杯置于分光光度计
的样品室中, 平衡3 min 后测A260 。再将温度升高到50 ℃ ,取出比色杯将其内壁的气泡赶出,测A260 。继续升温到80 ℃ , 平衡5 min 后测A260 。
按每次升高2 ℃ 的方式升温, 然后平衡温度( 5 min ) ,记录A260 。按此方式一直进行到A260 不再升高为止。
2 . 用恒温水浴装置测Tm
至少设定6个恒温水浴装置( 50 ℃、80 ℃、85 ℃、90 ℃、95 ℃、100 ℃) 。按操作规定预热紫外分光光度计20 min。
DNA 溶液的浓度控制在A260 = 0.4。取试管(至少8 支) , 向其中各加入3 ml DNA 溶液, 盖上帽子, 温育15 min。其中一支试管放室温,两支试管放100 ℃ , 其余温度水浴各一支, 温育完后迅速冷却试管, 室温和100 ℃一支置于冰浴10 min , 而另一支100℃则缓慢冷却到室温。
测定各管DNA 溶液的A260 , 而缓慢冷却的那支试管在室温下至少放置1h 再测。
3 . 结果处理
计算各温度下的A260 ( t)/ A260 ( 25 ℃ ) ,并以此比值对温度作图,连接各点成平滑曲线, 估计出光吸收增加的中点, 此即Tm 。计算G-C%含量。
检测标准
1、SN/T 2497.22-2010进出口危险化学品安全试验方法.第22部分:DNA的Tm值测定方法
