详细介绍
Tm值，即熔解温度或解链温度，是指DNA双螺旋结构在热变性过程中紫外吸收值达到Zui大值一半时的温度。不同序列的DNA具有不同的Tm值，DNA中G-C碱基对的含量越高，Tm值也越高，二者之间呈正比例关系。在DNA变性（熔解）过程中，其紫外吸收（在260nm波长处）值会随着双螺旋结构的解开而增加，直至完全解体。
在引物设计或其他与核酸相关的实验中，准确计算Tm值是非常重要的。对于长度为25个核苷酸以下的引物，Tm值的计算公式为：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)。对于更长的寡聚核苷酸，Tm值的计算更为复杂，会考虑多种因素如碱基组成、引物长度和使用的缓冲液离子强度等。
关于Tm值，北京清析技术研究院可提供Tm值测定等检测项目。北京清析技术研究院可对寡聚物，小鼠DNA，烟草花叶病毒，鸡蛋蛋白，抗体，酶，大肠杆菌基因等进行Tm值检测。
检测步骤
1 . 用循环恒温装置测Tm
按操作规程打开紫外分光光度计预热20 min。设定循环恒温装置于25 ℃ ,进行光吸收的初步测定。若是自制DNA, 先于25 ℃测其A260 , 用标准氯化钠-柠檬酸溶液稀释至A260 =0.4。并注意使其终体积适合于比色杯( 1 ml或3 ml)。
以标准氯化钠-柠檬酸溶液调整260 nm下光吸收零点。将装有待测的稀释DNA 溶液的比色杯置于分光光度计
的样品室中, 平衡3 min 后测A260 。再将温度升高到50 ℃ ,取出比色杯将其内壁的气泡赶出,测A260 。继续升温到80 ℃ , 平衡5 min 后测A260 。
按每次升高2 ℃ 的方式升温, 平衡温度( 5 min ) ,记录A260 。按此方式一直进行到A260 不再升高为止。
2 . 用恒温水浴装置测Tm
至少设定6个恒温水浴装置( 50 ℃、80 ℃、85 ℃、90 ℃、95 ℃、100 ℃) 。按操作规定预热紫外分光光度计20 min。
DNA 溶液的浓度控制在A260 = 0.4。取试管(至少8 支) , 向其中各加入3 ml DNA 溶液, 盖上帽子, 温育15 min。其中一支试管放室温,两支试管放100 ℃ , 其余温度水浴各一支, 温育完后迅速冷却试管, 室温和100 ℃一支置于冰浴10 min , 而另一支100℃则缓慢冷却到室温。
测定各管DNA 溶液的A260 , 而缓慢冷却的那支试管在室温下至少放置1h 再测。
3 . 结果处理
计算各温度下的A260 ( t)/ A260 ( 25 ℃ ) ,并以此比值对温度作图,连接各点成平滑曲线, 估计出光吸收增加的中点, 此即Tm 。计算G-C%含量。
检测标准
1、SN/T 2497.22-2010进出口危险化学品安全试验方法.第22部分:DNA的Tm值测定方法
| 成立日期 | 2016年06月17日 | ||
| 主营产品 | 气体检测,配方分析,失效分析,中药成分检测,油墨成分分析 | ||
| 经营范围 | 工程和技术研究与试验发展；医学研究与试验发展；自然科学研究与试验发展；农业科学研究与试验发展；技术推广、技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让；技术检测。（市场主体依法自主选择经营项目，开展经营活动；依法须经批准的项目，经相关部门批准后依批准的内容开展经营活动；不得从事国家和本市产业政策禁止和限制类项目的经营活动。） | ||
| 公司简介 | 北京清析技术研究院是由来自知名高校科研技术积累出来的团队，我院在华北、华南、华中、华东、西北等地区，建立27大分院及配套实验室。秉承母校校训，以严谨、求实的工作态度,为数千家企业客户提供产品研发、成分分析、材料检测、工业诊断、模拟测试、大型仪器测试、可信性验证等专业技术服务，还为全国范围内的律师事务所、医院、高等院校、提供专业技术务。北京清析技术研究院经过几十年的团队技术积累，技术研究院下设环境检 ... | ||
- 表冷器制冷效率检测，表冷器检测机构表冷器制冷效率检测，表冷器检测机构表冷器，全称表面式冷却器。其原理是让热媒或冷媒... 2024-11-26
- 磁性异物检测，磁性异物检测机构磁性异物检测，磁性异物检测机构磁性异物是指原本就具有磁性的物体或被磁化后具有磁性... 2024-11-26
- 耐高温油漆甲醛含量检测，耐高温油漆检测机构耐高温油漆甲醛含量检测，耐高温油漆检测机构耐高温油漆，高温漆，耐热漆，分有机硅和... 2024-11-26
- 热损失检测，热损失检测机构热损失检测，热损失检测机构热损失是指人体或建筑物向外散失的热量。清析技术研究院可... 2024-11-26
- 铝压力锅可靠性检测，铝压力锅检测机构铝压力锅可靠性检测，铝压力锅检测机构铝压力锅是指使用铝合金材料制成的压力锅，其内... 2024-11-26
