乙酰化就是将有机化合物分子中的氮、氧、碳原子上引入乙酰基CH3CO-的反应,常见的是组蛋白乙酰化。常用氯乙酰和醋酸酐等作为乙酰化剂。
乙酰化作用是生物体内经常进行的反应之一。例如:胆碱乙酰化形成生成乙酰胆碱,葡萄胺乙酰化生成乙酰葡萄胺。又如脂肪酸的合成,萜类化合物、胡萝卜素、类固醇的合成,都必须通过一系列的乙酰化反应。一般通过形成活性乙酰基即乙酰辅酶A而实现。
特征过程
这种催化乙酰化反应的方法,其特征在于:在醇或酚与乙酸酐所进行的乙酰化反应过程中,以[MORBSA][HSO4]离子液体作催化剂,催化剂用量占反应原料总摩尔数的0.5~1.0%,反应结束后,分离催化剂,测定反应转化率;其具体步骤如下:第1步[MORBSA][HSO4]离子液体的制备将摩尔比为1.1∶1的吗啡啉和1,4-丁烷磺内酯置于容器中,在50℃条件下,加入与反应物摩尔比为1∶0.8~1.2的乙醇作溶剂混合搅拌4~5h;反应结束后,得到白色固体1-烷基-3-(丁基-4-磺酸基)吗啉盐;将该盐用乙醚洗涤2~4次,并进行真空干燥;在室温下,将与上述1-烷基-3-(丁基-4-磺酸基)吗啉盐等摩尔的浓硫酸逐滴加入该盐中;于70~90℃下搅拌4~6h,得到[MORBSA][HSO4]离子液体;所得离子液体用乙醚洗涤2~4次,除去非离子残余物后进行旋蒸除去乙 醚;第2步乙酰化反应在室温下,醇或酚和乙酸酐摩尔比为1∶1.0~4.0的溶液中加入0.5~1.0mol%的[MORBSA][HSO4]离子液体,室温反应1~10min;反应完毕,得产物。
检测方法
乙酰化检测方法主要包括以下几种:
1、免疫印迹法(Western Blot)
这是一种常用的蛋白质分析方法,通过聚丙烯电泳分离蛋白质,将蛋白质转移到固相载体上与特异性抗体结合,再通过标记的二抗进行免疫反应,之后通过放射自显影等方法进行检测。
2、质谱分析(Mass Spectrometry, MS)
质谱技术可以确定蛋白质的乙酰化水平并准确定位乙酰化位点,包括液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)和串联质谱(MS/MS)。
3、免疫荧光检测法
这种方法能够在单细胞水平上直观地检测乙酰化组蛋白的分布和水平。
4、酶联免疫吸附法(ELISA)
通过特异性抗体捕获目标蛋白,使用带有酶标记的二抗检测,之后通过酶的活性来间接估计目标蛋白的浓度。
5、染色质免疫沉淀(ChIP)
通过使用特异性的抗体沉淀与乙酰化修饰相关的染色质复合物,分析沉淀下来的DNA或蛋白质,可以了解乙酰化修饰的靶基因以及与其他蛋白质的相互作用。
6、高通量测序技术
例如,ChIP-seq结合染色质免疫沉淀和高通量测序,可以全基因组范围内揭示乙酰化修饰位点的分布情况。
这些方法各有特点,适用于不同的研究需求和条件。
检测标准
1、LY/T 3037-2018 乙酰化木材
2、GB 29929-2013 食品添加剂 乙酰化二淀粉磷酸酯
3、GB 29932-2013 食品添加剂 乙酰化双淀粉己二酸酯
4、ASTM E222-23 用乙酸酐乙酰化法测定羟基的标准试验方法
5、HG/T 5847-2021乙酰化氨基油[4-氨基-N-[3-(乙羟乙基)砜基]苯基苯甲酰胺]
6、ASTM E222-17采用乙酸酐乙酰化作用测定羟基的标准试验方法
7、KS H ISO 3794-2019 精油(含叔醇)乙酰化后测定酯值估算游离醇含量
8、GB 1886.80-2015 食品安全国家标准 食品添加剂乙酰化单、双甘油脂肪酸酯