DPPH自由基清除原理的机制主要是通过DPPH分子与自由基发生反应,将自由基转化为稳定的分子,从而达到清除自由基的目的。DPPH分子是一种紫色的有机自由基,其分子结构中含有一个未成对的氮原子,使其呈现出明显的紫色。当DPPH分子遇到自由基时,自由基会与DPPH分子发生反应,将DPPH分子的未成对电子与自由基中的未成对电子结合,使DPPH分子从紫色变为无色,将自由基转化为稳定的分子。这个过程是一个氧化还原反应,也是DPPH自由基清除原理的基本机制。
检测方法
1.分光光度法
分光光度法是一种常用的检测方法,基本原理是通过测量化合物与DPPH反应后的溶液吸光度的变化来评估清除DPPH自由基能力。实验过程如下:
1)准备1mM的DPPH乙醇溶液。
2)将待测化合物按一定浓度体系添加到相应的试管中。
3)将相同体积的DPPH溶液加入到每个试管中,混匀。
4)放置在室温下,静置反应30分钟。
5)使用紫外可见分光光度计测量反应体系的吸光度,计算清除率。
2.电子顺磁共振法(EPR)
电子顺磁共振法是另一种常用的方法,通过测量化合物对DPPH自由基的清除能力,进而评估其抗氧化活性。实验过程如下:
1)准备含有DPPH和待测化合物的溶液。
2)使用电子顺磁共振仪测量样品的EPR信号,测量含有DPPH和不含DPPH的样品作为参比。
3)通过比较样品与参比的EPR信号来计算清除率。
3.原子力显微镜方法(AFM)
原子力显微镜方法是一种非常灵敏的方法,可以用于直接观察化合物对DPPH自由基的清除作用。实验过程如下:
1)制备DPPH自由基薄膜。
2)将待测化合物沉积到DPPH自由基薄膜上。
3)使用原子力显微镜观察样品的表面形态变化。
4)通过观察DPPH颜色的变化和表面形态的变化来评估清除率。
4.荧光法
荧光法是一种快速、灵敏且简便的检测方法,利用化合物与DPPH反应后荧光上转换的变化来评估清除DPPH自由基能力。实验过程如下:
1)制备DPPH乙醇溶液。
2)将待测化合物与DPPH溶液混合。
3)使用荧光光谱仪测量样品的荧光强度的变化。
4)通过荧光强度的变化来计算清除率。
检测标准
1、T/AHFIA 069-2022 白酒DPPH自由基清除率的测定酶标仪法
2、T/SHRH 006-2018化妆品-自由基(DPPH)清除实验方法