糜蛋白酶为胰腺分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性蛋白质,作用、用途与胰蛋白酶相似,比胰蛋白酶分解能力强、毒性低、不良反应小。糜蛋白酶用途广泛,尚可用于扭伤、中耳炎、鼻炎、鼻窦炎、咽炎、肺脓疡等治疗。可用于外科炎症、创伤、血肿及脓肿等,也可用于气管切开术。糜蛋白酶对痰多患者效果较好,使痰易于咳出。
关于糜蛋白酶,北京清析技术研究院可提供总酶活、酶特异性、pH值影响、温度影响、底物浓度影响、抑制剂检测、稳定性检测、纯度检测、活性检测、动力学特性分析、分子量测定、电泳分析、酶学参数测定、酶学性质测定、比活性测定、酶免疫测定、酶的结构特征分析、抗酶性试验、酶功能筛选、酶亲和力测定等检测项目。同时,北京清析技术研究院可对蛋白酶、氨基酸酶、酰胺酶、凝血酶、蛋白酶K、粘合素酶、铁膜蛋白酶、凝血激酶、肝胆酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、酚酞酶、酸性磷酸酶、烯丙醛酰胺酸酶、丙氨酸酶、酐酶、脂肪水解酶、氧化酶等进行糜蛋白酶的检测。
鉴别方法
取本品,加水溶解并制成每1ml中约含1mg的溶液,取0.05ml置白色点滴板上,加N-乙酰-L-酪氨酸乙酯试液0.2ml,混匀后,显紫红色。
效价测定
1 底物溶液的制备
取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1ml,混合,pH值为7.0)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀。冰冻保存,但不得反复冻融。
2 供试品溶液的制备
精密称取本品适量,加0.0012mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含12~16糜蛋白酶单位的溶液。
3 测定法
取0.0012mol/L盐酸溶液0.2ml与底物溶液3.0ml,照紫外-可见分光光度法(2010年版药典二部附录ⅣA),在25℃±0.5℃,于237nm的波长处测定并调节吸光度为0.200。再取供试品溶液0.2ml与底物溶液3.0ml,立即计时并摇匀,每隔30秒钟读取吸光度,共5分钟(重复一次),吸光度的变化率应恒定,恒定时间不得少于3分钟。若变化率不能保持恒定,可用较低浓度另行测定。每30秒钟的吸光度变化率应控制在0.008~0.012,以吸光度为纵坐标,时间为横坐标,作图,取在3分钟内成直线部分的吸光度,按下式计算。
式中P为每1mg糜蛋白酶的效价,单位;A2为直线上开始的吸光度;A1为直线上终止的吸光度;T为A2至A1读数的时间,分钟;W为测定液中含供试品的量,mg;0.0075为在上述条件下,吸光度每分钟改变0.0075,即相当于1个糜蛋白酶单位。