糜蛋白酶活性检测，亲和力测定

糜蛋白酶为胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质，作用、用途与胰蛋白酶相似，比胰蛋白酶分解能力强、毒性低、不良反应小。糜蛋白酶用途广泛，尚可用于扭伤、中耳炎、鼻炎、鼻窦炎、咽炎、肺脓疡等治疗。可用于外科炎症、创伤、血肿及脓肿等，也可用于气管切开术。糜蛋白酶对痰多患者效果较好，使痰易于咳出。

关于糜蛋白酶，北京清析技术研究院可提供总酶活、酶特异性、pH值影响、温度影响、底物浓度影响、抑制剂检测、稳定性检测、纯度检测、活性检测、动力学特性分析、分子量测定、电泳分析、酶学参数测定、酶学性质测定、比活性测定、酶免疫测定、酶的结构特征分析、抗酶性试验、酶功能筛选、酶亲和力测定等检测项目。北京清析技术研究院可对蛋白酶、氨基酸酶、酰胺酶、凝血酶、蛋白酶K、粘合素酶、铁膜蛋白酶、凝血激酶、肝胆酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、酚酞酶、酸性磷酸酶、烯丙醛酰胺酸酶、丙氨酸酶、酐酶、脂肪水解酶、氧化酶等进行糜蛋白酶的检测。

鉴别方法

取本品，加水溶解并制成每1ml中约含1mg的溶液，取0.05ml置白色点滴板上，加N-乙酰-L-酪氨酸乙酯试液0.2ml，混匀后，显紫红色。

效价测定

1 底物溶液的制备

取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1ml，混合，pH值为7.0）50ml，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀。冰冻保存，但不得反复冻融。

2 供试品溶液的制备

精密称取本品适量，加0.0012mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含12～16糜蛋白酶单位的溶液。

3 测定法

取0.0012mol/L盐酸溶液0.2ml与底物溶液3.0ml，照紫外－可见分光光度法（2010年版药典二部附录ⅣA），在25℃±0.5℃，于237nm的波长处测定并调节吸光度为0.200。再取供试品溶液0.2ml与底物溶液3.0ml，立即计时并摇匀，每隔30秒钟读取吸光度，共5分钟（重复一次），吸光度的变化率应恒定，恒定时间不得少于3分钟。若变化率不能保持恒定，可用较低浓度另行测定。每30秒钟的吸光度变化率应控制在0.008～0.012，以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。

式中P为每1mg糜蛋白酶的效价，单位；A2为直线上开始的吸光度；A1为直线上终止的吸光度；T为A2至A1读数的时间，分钟；W为测定液中含供试品的量，mg；0.0075为在上述条件下，吸光度每分钟改变0.0075，即相当于1个糜蛋白酶单位。