在生命科学研究中,代谢物是zuì贴近生理状态的终端读数。相比基因组、转录组和蛋白组,代谢组学(Metabolomics)直接反映了细胞和机体对内外环境变化的响应,成为研究疾病机制、生物标志物发现和药物作用机制的关键工具。而在代谢组学家族中,靶向代谢组学(Targeted Metabolomics)因其高灵敏度、定量jīngzhǔn和生物学解释性强的优势,在众多科研项目中发挥着越来越重要的作用。那么,什么是靶向代谢组学?它的基本原理与核心技术有哪些?本篇文章将为您系统解析。
靶向代谢组学的定义
靶向代谢组学是指以已知代谢物为研究对象,通过jīngquè定量手段对特定代谢物及其动态变化进行检测和分析的一类研究策略。与无偏探索的非靶向代谢组学(Untargeted Metabolomics)不同,靶向方法具有高特异性、高灵敏度和定量准确性强的特点,常用于验证假设、探索机制或进行生物标志物的验证研究。
典型应用场景包括:
疾病诊断标志物的验证(如糖尿病、癌症、心血管疾病等)
药代动力学与药效学研究
代谢通路机制解析(如葡萄糖代谢、脂肪酸代谢等)
临床转化研究与个体化医疗
靶向代谢组学的基本原理
靶向代谢组学的核心在于定量与特异性。其研究流程主要包括以下几个步骤:
1、目标代谢物的选择
研究者根据生物学假设或文献资料,选定与研究问题高度相关的代谢物。例如,在糖尿病研究中,葡萄糖、乳酸、酸、支链氨基酸(BCAAs)等是常见靶标。
2、标准品建库
使用高纯度标准品构建定量分析所需的校准曲线和响应因子,以保证后续分析结果的准确性和可重复性。
3、样本处理与提取
依据代谢物的化学性质(极性、稳定性、挥发性等),选用合适的样本预处理策略(如蛋白沉淀、固相萃取SPE等)以提高提取效率和信号强度。
4、质谱检测与定量
结合高效液相色谱(LC)或气相色谱(GC)与质谱联用技术(MS或MS/MS),在多反应监测模式(MRM)或选择反应监测(SRM)下实现代谢物的定量分析。
5、数据分析与生物学解释
通过多重校正与统计分析,结合生物通路数据库(如KEGG、HMDB、MetaboAnalyst等)进行代谢通路富集与机制解读。
靶向代谢组学的关键技术
靶向代谢组学的成功实施,依赖于多种关键技术的协同优化。以下是当前主流且广泛应用的几种核心技术:
1、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)
(1)优势:
适用于极性较强的代谢物,如氨基酸、有机酸、核苷等
灵敏度高、定量范围广
MRM模式下具有极高的特异性
(2)常见平台:
三重四极杆质谱(uad, QqQ)
QTRAP系统(具有增强扫描能力)
2、气相色谱-质谱(GC-MS)
(1)优势:
适合检测小分子挥发性代谢物,如脂肪酸、有机酸、糖类
重复性高,适用于长期追踪研究
(2)前处理要求较高:通常需要衍生化处理(如TMS衍生)提高挥发性
3、标准品定量策略
靶向代谢组学必须依赖高质量标准品进行定量校准。常用方法包括:
外标法(External Calibration):使用已知浓度标准品建立标准曲线
内标法(Internal Standard):加入稳定同位素标记内标,用于校正信号漂移与样本损失
juéduì定量(Absolute ):实现单位浓度(如μmol/L)水平的准确测定
4、多重反应监测(MRM/SRM)模式
这是靶向代谢组学中zuì关键的质谱扫描方式之一。其原理是:在三重四极杆中设定特定前体离子与产物离子对,实现对目标代谢物的高灵敏、高特异性检测。
优势:
可监测上百种代谢物
背景噪声低,适合复杂生物样本
与同位素内标配合使用,定量精度更高
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| 成立日期 | 2015年12月23日 | ||
| 法定代表人 | 王素芹 | ||
| 注册资本 | 100 | ||
| 主营产品 | 蛋白组学,从头测序,生物制药分析,代谢组学 | ||
| 经营范围 | 技术开发、技术推广、技术转让、技术咨询、技术服务;货物进出口、技术进出口、代理进出口;销售机械设备、化工产品(不含危险化学品)。(依法须经批准的项目,经相关部门批准后依批准的内容开展经营活动。 | ||
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