纳豆激酶活性检测，出具第三方检测报告

纳豆激酶是由Bacillus subtilis（natto）分泌的一种碱性丝氨酸蛋白酶，具有半衰期长、特异性强、副作用小、可直接口服等优点。

关于纳豆激酶，北京清析技术研究院可提供稳定性、活性、等电点、稳定性、分子量、PH值、营养化学成分分析等检测项目。北京清析技术研究院可对纳豆、纳豆味噌、纳豆粉、纳豆豆腐、纳豆素、纳豆酱、纳豆面、纳豆面筋、纳豆酥、纳豆口味零食、纳豆面包、纳豆馅饼、纳豆饺子、纳豆酪、纳豆脆片、纳豆汤、纳豆麦片、纳豆粥、纳豆夹心饼干、纳豆沙拉等进行纳豆激酶的检测。

检测方法

1. 纤维蛋白平板法

主要原理是以琼脂糖作为相应的骨架，加入相应浓度的凝血酶和纤维蛋白原，二者相互作用，从而在琼脂糖平板上形成人工血栓。纳豆激酶能将人纤维蛋白降解为可溶性的纤维蛋白片段，便会有溶解圈出现，根据溶解圈的直径，推测纳豆激酶活力强弱。具体方法如下：10mL琼脂糖溶液(1%)和10 mL牛纤维蛋白原溶液(1.8 mg/mL, 50mM Tris-HCl缓冲液)分别在60℃下培养；10U凝血酶加入琼脂糖溶液混合；再和纤维蛋白原混合；在室温下放置2小时，形成纤维蛋白凝块；纤维蛋白板上打孔，每孔加酶液40μL，置于37℃下4小时以检测激酶的纤溶活性。

2. 酪蛋白分解法

根据Folin-酚测定法，定量检测样品中纤溶酶活性。蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸，在碱性条件下，酪氨酸与Folin-酚试剂反应生成蓝色物质，于680nm处比色测定光吸收值，计算酶活力。具体方法如下：0.5%酪蛋白2 Ml (35℃预热5 min)，粗酶液1 mL，35℃反应10min (严格控制时间)，3 mL 10% TCA终止反应，放置15 min，过滤，加0.55 mol/L Na2CO3 5mL，Folin-酚1 mL，35℃水浴15 min，680 nm比色。酶的活力单位CU (Casein degradationunit)规定为酶在温度35℃、pH7.5时，单位时间、单位体积产物生成的量为一个活力单位。

3. 四肽底物法

四肽底物法是根据胰凝乳蛋白酶活测定方法改进而来。在溶液中加入琥珀酰丙氨酰丙氨酰脯氨酰苯丙氨酰对硝基苯胺作为底物，加入酶液，于37℃水浴孵育1min，测定单位时间内410 nm处光吸收的变化。酶活力单位的定义为1 min内水解该四肽底物生成1 μmoL硝基苯胺的酶量为1IU。

4. TAME底物法

纳豆激酶对精氨酸羧端肽有较强的切割作用，可选择对甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯为底物测定酶活性。在37℃纳豆激酶将底物切割成对甲基苯磺酰-L-精氨酸和甲醇，高锰酸钾将甲醇氧化成甲醛，甲醛再与变色酸在沸水浴中发生显色反应，生成蓝紫色复合物，此复合物颜色稳定，在574nm处有Zui大吸收。

检测标准

1、T/CQAP 2001-2022 纳豆粉

2、T/CNLIC 0036-2021 纳 豆

3、DBS44/ 013-2019 食品安全地方标准 纳豆粉