植物遗传转化是应用重组DNA技术、细胞组织培养技术或种质系统转化技术,有目的地将外源基因或DNA片段插入到受体植物基因组中并通过减数分裂获得新植株的技术。
关于植物遗传转化,北京清析技术研究院可提供基因整合率、外源基因表达水平、抗逆性评估、生长发育特性、产量性状、品质指标、抗病虫害性能、环境交互作用、遗传稳定性、转基因植株生态学效应、代谢产物分析、基因组学分析、蛋白质组学分析、细胞学特征、形态学特征等检测项目。北京清析技术研究院可对水稻、小麦、玉米、大豆、番茄、马铃薯、烟草、棉花、油菜、甘蔗等进行植物遗传转化检测。
实验流程
引物设计:设计带有载体的同源序列的引物,根据需求利用pcr扩增基因全长或CDS
质粒提取及载体酶切:将需要构建的空载体,摇菌提取质粒,进行酶切
跑胶、回收:将酶切产物及pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳,对目的条带切胶回收
载体构建:利用同源重组方式进行连接载体,转化大肠杆菌感受态,涂在载体抗性的LB培养基上
挑菌鉴定,送测序:挑取单菌落,摇菌,进行菌液pcr鉴定,条带大小正确送测序,比对测序结果
转化农杆菌:测序正确的菌液,摇菌,保菌提质粒,转化农杆菌
侵染:转化后涂板长出的农杆菌,挑取单克隆进行菌液鉴定,鉴定后摇菌,侵染拟南芥
筛选阳性苗:侵染后的拟南芥收种子,在抗性板上筛选阳性苗
鉴定:利用载体和片段上引物PCR鉴和提取RNA反转录后进行QRT-PCR进行鉴定
检测标准
1、T/CAB 0323-2024农杆菌介导植物遗传转化通用技术规程
2、DB15/T 2044-2020 农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程
3、T/GXAS 408-2022 农杆菌介导甘蔗遗传转化技术规程
4、T/SDAS 357-2022 农杆菌介导丹参遗传转化技术规程
5、T/SDAS 358-2022 农杆菌介导金银花遗传转化技术规程
6、DB15/T 2188-2021农杆菌介导油菜黑胫病菌(Leptosphaeria biglobosa)遗传转化技术规程