如何通过Edman降解实现高效蛋白质序列分析？实验室指南

Edman降解是一种经典且高度特异的蛋白质N端序列分析技术，至今仍在结构蛋白质组学、抗体工程与生物药研发中扮演着重要角色。高分辨率质谱技术日新月异，Edman降解因其对N端氨基酸的逐步解析能力，在某些特定应用场景中仍具有bùkětìdài的价值。本文将从实验原理、操作流程、样本准备、结果解析及常见问题出发，系统解析如何高效开展Edman降解实验，助力科研人员获得可靠的蛋白质序列信息。

一、什么是Edman降解？

Edman降解由Pehr Edman于1950年提出，是一种通过周期性化学反应从多肽N端逐个释放氨基酸残基并进行鉴定的技术。它的核心在于利用酚异硫氰酸酯（PITC）与N端氨基酸反应，形成可被裂解和分析的衍生物，从而实现序列的“逐步拆解”。与质谱分析不同，Edman降解不依赖质量电荷比（m/z），而是基于化学选择性，在已知目标蛋白并需要验证N端完整性、识别修饰或突变时尤为有效。

二、Edman降解的适用场景

现代蛋白质组学多依赖质谱，但Edman降解仍在以下情境中发挥着独特优势：

• 重组蛋白或单克隆抗体的N端验证

• 蛋白修饰或截断的鉴定

• 用于验证质谱推测结果的准确性

• 无法离子化或质谱响应弱的样本

在百泰派克生物科技的实际项目中，我们常结合Edman降解与质谱分析交叉验证蛋白质序列，提升结果的可靠性。

三、Edman降解的基本流程

1、样本固定（Immobilization）

Edman降解通常要求样品被固定在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜或玻璃纤维片上，防止反应中蛋白丢失。通常通过SDS-PAGE转膜完成，需避免使用干扰化学物质如Tween-20。

2、N端氨基酸衍生化

使用酚异硫氰酸酯（PITC）与N端氨基反应，形成环状PTH氨基酸衍生物。该反应在碱性条件下进行，对水敏感，对环境控制较为严格。

3、裂解与回收

加入无水酸使肽链裂解，释放PTH氨基酸。该步骤需高效回收PTH产物以确保后续分析的灵敏度。

4、分析与鉴定

利用高效液相色谱（HPLC）或毛细管电泳分析PTH衍生物，通过保留时间匹配标准氨基酸来确认N端序列。

四、实验成功的关键因素

为了获得高质量的序列数据，以下几点尤为关键：

1、样本纯度

Edman降解对样本纯度要求极高。混杂蛋白会导致多重信号干扰，影响序列判断。

2、N端可接近性

如果N端被封闭（如乙酰化、修饰或信号肽未切除），将无法进行Edman降解。预处理酶切或化学去修饰可能是必要步骤。

3、转膜完整性

蛋白在电泳后转膜过程中若发生降解或迁移失败，亦会影响反应效率。

4、每循环反应效率

随着反应周期增加，降解效率会逐步下降。通常建议读取前10–20个氨基酸。

五、Edman降解 vs 质谱：如何选择？

建议策略： 若关注N端序列完整性或修饰，Edman降解是优选方法；若需获取整体序列或高通量分析，质谱更具优势。在百泰派克生物科技，我们提供Edman降解与高分辨质谱相结合的综合蛋白质测序方案，为客户定制zuì合适的策略。

在百泰派克，我们拥有：

• 自动化Edman降解仪

• 标准化PVDF转膜流程与样本前处理体系

• 与高分辨质谱联合验证方案

• 支持科研项目申报的完整技术资料与报告交付

无论您是进行单抗质量验证、N端修饰检测，还是为药物申报准备质量研究数据，我们都可提供高灵敏、高可靠的蛋白质序列分析服务。

Edman降解是一项“老牌技术”，但其在蛋白质N端序列解析领域仍具有独特价值。尤其在结构验证、生物制药质控和蛋白工程中，准确的N端信息往往是不可忽视的关键。如果您正在寻找高效、jīngzhǔn、可验证的蛋白质序列分析服务，欢迎联系百泰派克生物科技。我们不仅提供技术，更提供zhídexìnlài的数据支持与科研合作伙伴关系。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.zhuānyè生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标进行表征，百泰派克生物科技可做到检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

https://www.biotech-pack.com/index.html