基于IEF的蛋白等电点分析-百泰派克生物科技

蛋白质分子是两性电解质，当调节溶液的酸碱度，使蛋白质分子上所带的正负电荷相等时，在电场中，该蛋白质分子既不向正极移动，也不向负极移动，这时溶液的pH值，就是该蛋白质的等电点（isoelectric point, pI）。蛋白的等电点与其氨基酸序列和三维结构密切相关，特定蛋白的等电点是固定的，可以通过比较不同蛋白质的等电点来研究它们的结构和功能差异，jīngquè测定等电点是生物制品电荷异质性表征的重要一环。

等电聚焦（Isoelectric Focusing，IEF）是一种非常有效的蛋白质等电点分析技术。其利用等电点处的蛋白质电荷为零的特性，带电的蛋白质在电泳中向极性的方向迁移，当到达其等电点（此处的pH值使相应的蛋白质不再带电荷）时，电流达到zuì小，不再移动，从而达到检测生物制品等电点的目的。百泰派克生物科技（BTP）通过CNAS/ISO9001双重质量认证体系；公司根据IEF原理，建立了针对于不同类别生物制品的蛋白等电点检测平台，可实现对蛋白、抗体、疫苗、多肽、胶原蛋白等的等电点jīngquè测定。

实验仪器

GE公司的Ettan IPGphor 3

技术应用

基于cIEF的等电点分析，检测器采集280nm处的吸收峰。对于280nm处无吸收峰的生物制品，例如胶原蛋白，cIEF的方法显然不太合适。基于IEF的方法是对280nm处无吸收峰蛋白等电点检测的有效补充，并在胶原蛋白类生物制品和医疗器械表征中得到广泛应用。

案例示意

实验过程中，一根胶条用来测试Marker，对预制胶条的pI分布情况进行校准，一根胶条用来测试样品；两个胶条进行等电聚焦以减少系统误差。

左边为pI marker结果，右边为胶原蛋白样品结果

典型问答

问题1：为什么多数蛋白质的等电点是中性偏酸性？

回答：蛋白质是由氨基酸组成的，而大多数氨基酸等电点小于人体的pH（pH=7.4），故而大多数的蛋白质的等电点偏酸性，如山羊胃蛋白酶等电点约为3。

问题2：有没有等电点偏碱性的蛋白质？

回答：存在pI碱性的蛋白质。当蛋白质中的碱性氨基酸，如组氨酸，精氨酸、赖氨酸、比列较大，会导致等电点偏碱性，如鱼精蛋白等电点约为12。

问题3：做等电点检测，两种检测方法如何选择？

回答：基于CIEF的等电点检测需要样品具有280nm的紫外吸收；不具有280nm的紫外吸收的样品（例如胶原蛋白）进行基于IEF的等电点检测。

中/英文项目报告

在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：

实验步骤（中英文）

• 相关的实验参数（中英文）

• 基于IEF的蛋白等电点分析详细信息

• 电泳图片

• 原始数据

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相关服务

蛋白质等电点测定

其他服务项目

优质检测平台

（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台

该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:

（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台

该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;

（3）生物药物表征平台

该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:

（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台

该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;

（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台

采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;

（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台

基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;

（7）生信云平台

基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

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