聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的特点是能将微量的DNA大幅增加。无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。
PCR原理用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段,类似于天然DNA的复制过程。以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5’末端和3’末端互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。
关于PCR,北京清析技术研究院可提供目的DNA序列、引物、酶、模板DNA浓度、扩增时间、扩增温度、热启动时间、热启动温度、退火温度、灵敏度、特异性、重复性、可重复性、线性范围、扩增效率、内参基因、阳性对照、阴性对照、核酸纯度等检测项目。北京清析技术研究院可对基因突变、基因表达水平、微生物数量、病毒数量、细胞检测、一些慢性疾病的检测、食品安全检测、环境污染检测、药物残留检测、遗传性疾病的检测、肿瘤组织检测、人类、动物和植物的种群遗传学检测、侵入性物种的检测与管控、生物多样性监测、血型检测、性病检测、辅助生殖技术、病原菌鉴定与分型等进行PCR检测。
检测步骤
PCR(聚合酶链反应)检测是一种常用的分子生物学技术,用于放大和检测特定的DNA或RNA序列。以下是PCR检测方法的详细步骤:
标本采集。通过鼻咽拭子或口咽拭子采集样本,拭子插入鼻咽部并旋转以收集含有病毒的分泌物。
核酸提取。采集的拭子样本放入含有病毒的无菌管中,使用商业试剂盒提取病毒RNA。这一步包括将样品与裂解缓冲液混合以裂解病毒,并使用旋转柱进行纯化,去除蛋白质和其他杂质。
逆转录和PCR扩增。提取的RNA需要经过逆转录成cDNA(互补DNA),进行PCR扩增。对于某些病毒(如冠状病毒),其含有单链RNA基因组,需要通过逆转录酶将RNA转化为其互补的DNA,这种方法称为RT-PCR。
结果分析。PCR扩增后,通过琼脂糖凝胶电泳或实时荧光检测分析扩增产物,以检测目标序列的存在。
PCR检测的优点包括高灵敏度、高特异性和高效率,能够快速检测微量的核酸分子,适用于多种标本类型如血液、尿液等。
检测标准
1、DB6540/T 022-2023 马红球菌PCR检测方法
2、SN/T 5371-2021国境口岸血吸虫PCR和荧光PCR检测方法
3、SN/T 3557-2013 黄热病毒RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法
4、DB21/T 3084-2018羽绒制品中鹅绒的鉴别PCR法和实时荧光PCR法
5、T/CACM 1027.104-2018 铁皮石斛PCR鉴定
6、T/CACM 1027.105-2018 白及快速PCR鉴定
7、SN/T 5558-2022 转基因香石竹(康乃馨)检测普通PCR和实时荧光PCR法
8、DB22/T 3440-2023 人粪便中华支睾吸虫虫卵检测PCR和实时荧光PCR法
9、DB33/T 2247-2020鸭坦布苏病毒RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测方法