植物抗氧化酶活性测定，抗氧化酶活性检测

抗氧化酶是超氧化物歧化酶、硫氧还蛋白过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶等的统称。抗氧化酶具有将体内形成过氧化物转换为毒害较低或无害的物质的功效。定义一旦在体内形成过氧化物，它们即刻发挥作用，利用氧化还原作用将过氧化物转换为毒害较低或无害的物质。概念酶是生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，其中抗氧化酶能够起到减缓氧化速度的作用。

检测方法

1.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法

SOD能够催化超氧阴离子（O2）的还原反应，将其转化为较为稳定的氧气和过氧化氢。常见的SOD活性测定方法有：

标准醛缩法：根据SOD催化的还原反应，利用NBT（硝基蓝盐）和醛缩剂的变色反应来测定SOD活性。

自动化测定法：利用包含其中一种还原物质和pH染料的较为稳定的底物，通过测定底物的氧化程度来确定SOD活性。

XTT法和WST1法：由于SOD具有还原型的性质，可以通过测定细胞培养基中的还原型琼脂糖（XTT）或水溶性四硝基噻唑盐（WST1）的还原动力学来测定其活性。

2.过氧化氢酶（CAT）活性测定方法：CAT主要参与还原过氧化氢（H2O2），将其转化为氧和水。常见的CAT活性测定方法有：

色素法：利用黄曲霉素作为还原剂，观察黄曲霉素的消费量来测定CAT活性。

光度法：通过测定样品中H2O2浓度的下降程度来间接测定CAT活性。

氧化还原电极法：通过测定样品中H2O2浓度的下降速度来测定CAT活性。

3.过氧化物酶（POD）活性测定方法：POD主要参与氧气与还原型供体之间的氧化还原反应，转化为过氧化物（ROO）。常见的POD活性测定方法有：

色谱法：利用酚类底物的氧化反应，测定产生的醌类产物的含量来测定POD活性。

酶标法：POD催化氧化反应会形成有色产物，通过测定产物的吸光度来测定POD活性。

检测步骤

抗氧化酶活性的测定方法主要包括以下几个步骤：

1、样本处理

使用磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤细胞或组织样本以去除杂质，使用超声波分散器处理样本以破碎细胞膜，使细胞内的抗氧化酶完全释放。将样本转移到离心管中，使用超低温离心机离心10分钟，去除残留物。

2、酶的吸附

取一定量的离子交换树脂，装入柱中，使其充分吸附抗氧化酶。将破碎的样本溶液缓慢滴入柱中，让抗氧化酶与树脂结合。使用PBS洗涤柱上的抗氧化酶，去除非特异性结合物。

3、活性测定

使用活性酯酶底物测量抗氧化酶的活性。通过底物的降解速率可以测定抗氧化酶活性。

还有一些特定的抗氧化酶活性测定方法，如超氧化物歧化酶(SOD)的氮蓝四唑光化还原法，这包括试剂的配制和酶活性的测定。这些方法提供了对特定抗氧化酶活性水平的准确测量，有助于了解细胞的氧化应激状态。

检测标准

1、YY/T 1458-2016抗甲状腺过氧化物酶抗体定量检测试剂(盒)(化学发光免疫分析法)

2、DB35/T 1148-2011 原料用超氧化物歧化酶

3、T/CBFIA 02003-2023 葡萄糖氧化酶制剂

4、HG/T 4657-2014 纺织染整助剂 过氧化氢酶酶活力的测定

5、GB/T 41906-2022 超氧化物歧化酶活性检测方法