糖基化分析是Z_U_I具挑战性的翻译后修饰分析之一。糖基化修饰通常是以基团为单位,而非单个修饰。是蛋白质上的单个糖基化位点,也可能具有不同的链长和连接不同分支的多种聚糖异构体。O-糖基化(O-Glycan,也称O糖,O聚糖)主要通过末端单糖残基与丝氨酸或苏氨酸的OH基之间的糖苷键与多肽连接。O糖连接的氨基酸的共有序列尚不清楚,且O糖的结构多样,可以分为具有相对异质核心结构的几个结构家族。
O-连接聚糖的不同核心结构
与N-糖不同的是,目前还没有能消化大多数O糖的通用酶。O-聚糖酶仅可酶解未被取代的O-GalNAc双糖起始的聚糖。通过化学法对O-聚糖进行水解是更通用的方法,大部分O-聚糖可从O-糖肽释放,即β-脱除。
糖分析中样品制备的一般流程
可使用MALDI-TOFMS对O-聚糖进行分析,通过对衍生化反应后甲基化的O-聚糖进行分析,从而将所有羟基转化为甲基醚,并通过对羧基上的唾液酸进行甲酯化进行稳定后,使得MALDITOF MS可以在正离子模式下对O-糖进行分析。对甲基化的O-糖进行质谱分析,便可获得有关聚糖组成的信息。
基于质谱的O聚糖分析示意图
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1-. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. O-糖分析结果
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