糖基化主要是指将聚糖连接到蛋白质、脂质或其他有机分子上的酶促过程，是Z_U_I常见的蛋白质翻译后修饰（PTM）。由于连接的聚糖的复杂性和同量异位性质，糖基化分析十分具有挑战性。随着蛋白质治疗剂在临床实践中的应用增多，如单克隆抗体、糖蛋白、激素、细胞因子和凝血因子，蛋白质N-糖基化（也称作N聚糖，N糖）的检测受到越来越广泛的关注。
不同生物内产生的不同类型的N-聚糖
N糖（N-Glycan）是一种含有Man3-GlcNAc2的寡糖结构，它们通过末端N-乙酰基葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺的NH2基团之间的糖苷键与蛋白质的多肽链连接。大多数聚糖分析的样品制备步骤包括糖蛋白的消化、去糖基化、纯化、标记/衍生化和SPE。根据样品的特性，也可以使用其他步骤和技术进行样品制备。
N糖链分析的一般流程（以抗体为例）
可利用MALDI TOF MS和/或UHPLC技术，对聚糖及其种类进行分析。
基于MALDI-TOF MS技术的N聚糖分析
MALDI-TOF对糖基化化合物的结构表征具有很高的灵敏度，且可实现高通量检测。在对混合物N糖进行分析时，MALDI通过单电荷离子的形成对样品进行分析，而不是电喷雾电离进行分析。使用N-糖苷酶A或F酶促反应，释放样品的N糖后，将样品甲基化后进行检测。
基于质谱的N糖链分析
基于HILIC-UHPLC MS技术的N糖谱（N-Glycanprofiling）分析
基于LC-MS的N糖分析是现在的主流分析方法，亲水相互作用色谱法（HILIC）可用于N糖分析，PNGaseF酶促反应释放的N糖，利用2-氨基苯甲酰胺(2-AB)对释放所得的糖链进行衍生化，对衍生后的糖链进行测定，可用于大量样本N糖的分析。在进行荧光标记之前，如果存在大量可能干扰衍生化反应的去污剂、非挥发性盐或带有游离氨基的物质，可通过TSKAmide-80色谱柱对N糖进行纯化。标记后的N糖通过HILIC-UHPLC MS进行分析。
利用HILIC色谱柱进行N-聚糖分析的常规流程
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