HILIC-UHPLC分析N-聚糖键
N-聚糖通过N-糖苷酶F(Peptide N Glycosidase F,PNGaseF)反应从糖蛋白中水解出来。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲酰胺(2-AB)标记,然后用多种外切糖苷酶消化。Z_U_I后,通过亲水相互作用色谱法(HILIC)结合荧光和质谱检测对聚糖进行分析。
N-聚糖键分析一般步骤
1-. 样品制备
2. N聚糖水解
3. 2-AB标记和标记的聚糖与一系列外切糖苷酶顺序反应
4. 基于UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外,可以通过MS/MS片段确定详细的聚糖结构
内切糖苷酶的作用:
内切糖苷酶能从糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不会从结合的蛋白质和脂质分子中水解寡糖。内切糖苷酶通过破坏聚合物中两个糖单体之间的糖苷键起作用。
内切糖苷酶H:水解低聚甘露糖和杂合N-聚糖
内切糖苷酶F:水解简单的二价N-聚糖
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