免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法,主要是用于抗原或抗体的定性检测,以及纯化目的蛋白质的常规方法。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档,已成为研究蛋白质相互作用的经典方法。
不难看出,免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似,所不同的是,在免疫共沉淀中,对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的蛋白替代。
免疫沉淀的应用场景
(1)免疫沉淀(IP)一般可用于以下的研究分析
1.磷酸化位点分析
2.激酶活性分析
3.乙酰化位点发现与鉴定
免疫共沉淀的应用场景
(2)免疫共沉淀(Co-IP)一般可用于以下的研究分析
1.利用质谱鉴定相互作用蛋白
2.蛋白相互作用的验证
3.缺失分析联合co-IP进行蛋白互作结构域分析
4.测定两种目标蛋白质是否在体内结合
5.确定一种特定蛋白质的新的作用搭档
6.分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物
免疫沉淀(IP)实验相关技术知识介绍(原理、方法、步骤及常见问题和注意事项)(点击了解更多:免疫共沉淀(Co-IP)/免疫沉淀(IP)服务:https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service)
免疫沉淀是基于传统亲和纯化方法开发的,在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A-Beads(预先将Protein A固定结合在磁珠上),根据抗原与抗体、Protein A与抗体的FC的特异性,形成“抗原-抗体-ProteinA-Beads”复合物,清洗离心后去除溶液中未结合的杂蛋白,检测是否存在目的蛋白。与传统的柱式亲和纯化相比,免疫沉淀的目标是仅分离足够用于WesternBlot或其他检测方法检测的蛋白质。通常可以将已处理和未处理的样品进行比较,从而评估目标蛋白的相对量。
实验方法:
该实验的方法很简单,可以概括为以下几步:
Step1: 蛋白样品准备,细胞需提前裂解
Step2: 加样,抗原抗体结合,protein A 琼脂磁珠与抗体结合
Step3: 免疫沉淀分离
Step4: 洗脱蛋白复合物
Step5:分析检测—Western Blot或者质谱