杂交瘤单克隆抗体技术是应用适当的抗原免疫小鼠,取免疫鼠(PEG) 与鼠的脾细胞(抗体形成细胞)或取体外免疫的脾细胞,借助聚乙二醇骨髓瘤细胞系融合形成分泌单克隆抗体的杂交瘤,若接种于小鼠腹腔便产生腹腔杂交瘤,这种瘤细胞就能源源不断地分泌出特异性的单克隆抗体。
杂交瘤是由一种短命的,但能分泌某种特异性抗体的B淋巴细胞和长命的骨髓瘤细胞融合而成的。这种杂交的细胞是长命的细胞系,它能分泌一种纯一分子的特异性抗体,称为单克隆抗体(monoclonalantibody)。
杂交瘤技术原理
单克隆抗体由单一B淋巴细胞分泌得到,但B淋巴细胞在体外不能长期存活(两周),无法制备单一B淋巴细胞群,也无法进行单抗的大量生产。骨髓瘤细胞不具备分泌抗体的能力,可以在体外培养条件下无限繁殖。将免疫B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞,得到的杂交细胞具有双亲细胞的遗传特性,既能像B淋巴细胞一样分泌抗体,又能像骨髓瘤细胞一样无限增殖,成功克服了B淋巴细胞在体外存活周期短的问题。对杂交瘤细胞进行培养,即可得到单克隆抗体。
杂交瘤细胞特点
具备抗体分泌功能
保持细胞永生性
杂交瘤技术制备流程
利用杂交瘤技术制备单克隆抗体通常操作流程为:抗原制备、抗原免疫动物、杂交瘤细胞制备、融合细胞的筛选、培养杂交瘤细胞制备抗体。
义翘神州杂交瘤细胞抗体基因测序服务简介:
杂交瘤细胞存在容易污染、状态不好或抗体基因丢失的风险,对杂交瘤细胞中的抗体基因进行提取及测序尤其重要,获得相应核苷酸序列后,便可用于后期外源抗体表达及生产,通过此种方式可以将抗体基因长期保存。
义翘神州(cn.sinobiological.com)提供的杂交瘤细胞抗体基因测序服务,不仅可以快速获得单抗的基因,还可以利用成熟的密码子优化及表达技术,为客户进行工程化表达与纯化服务。
服务优势:
①可克隆抗体重、轻链可变区基因或抗体全长基因
②经验丰富的引物设计及抗体基因分析能力
③多种属(人、小鼠、大鼠等)、多亚型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgM等)抗体基因测序能力
④可提供从抗原生产 — 抗体制备— 杂交瘤细胞抗体基因测序 — 嵌合抗体生产等一站式服务
义翘杂交瘤细胞抗体基因测序服务内容:
具体步骤
①RNA提取
②反转录
③PCR扩增重链及轻链序列
④测序验证
⑤载体构建
⑥交付内容
⑦抗体重链及轻链序列
⑧分别含有抗体重链、轻链的商业表达载体
重组抗体生产及抗体/抗原结合验证服务
具体步骤:
①测序获得的抗体序列经HEK293细胞重组表达及纯化
②ELISA验证抗原与抗体的结合
交付内容:
①纯化抗体
②质量检验报告(CoA)