如何在纯化后验证外泌体完整性？

外泌体（Exosomes）是由细胞通过内吞分泌途径形成的纳米级囊泡，广泛存在于血浆、尿液、唾液、乳液等多种体液中。它们在细胞通讯、疾病标志物筛选及药物递送等领域展现出巨大应用潜力。外泌体功能的研究基础是确保其结构与生物学完整性，否则可能导致实验数据偏差甚至错误。建立一套科学、系统的外泌体完整性验证方案，是高质量外泌体研究的关键前提。

一、为什么外泌体完整性如此重要？

外泌体具有典型的脂质双层膜结构，其直径通常在30–150 nm之间，内部包含特定的蛋白质、RNA和脂质成分。在提取和纯化过程中，若操作不当极易造成外泌体膜破裂、聚集或与其他细胞碎片、脂滴混淆，影响后续功能实验及组学分析的可靠性。在确认外泌体是否成功纯化之前，必须从粒径分布、膜结构、标志蛋白表达和囊泡形态等多个维度综合评估其完整性。

二、四大常规方法验证外泌体完整性

1、纳米颗粒追踪分析（NTA）：评估粒径和浓度

外泌体完整性的dìyī道关口是其粒径是否符合预期。NTA通过激光散射与布朗运动轨迹追踪，能jīngzhǔn测定粒径分布和粒子浓度。典型外泌体应主要集中在30–150 nm之间。

NTA结果解读要点：

• 单一峰值表示外泌体较为纯净

• 出现多个粒径峰，或明显大于150 nm，则可能存在聚集体、微囊泡或脂滴污染

• 粒子浓度过低可能暗示提取效率不足或囊泡破裂

动态光散射（DLS）虽也能提供粒径信息，但分辨率低，无法jīngquè区分多种粒径组分，不建议单独用于外泌体完整性验证。

2、透射电子显微镜（TEM）：直观观察囊泡结构

TEM是验证外泌体形态和膜完整性的金标准。高质量的外泌体在负染条件下呈典型的杯状或碗状结构，具备清晰的双层膜轮廓。

出现以下情况可能提示外泌体完整性受损：

• 囊泡膜模糊、塌陷或变形

• 存在大量杂质或非囊泡结构

• 囊泡直径明显异常，或形态不均一

TEM虽不具备定量能力，但在结构确认方面bùkětìdài，是所有外泌体文章中审稿人zuì为关注的图像数据之一。

3、Western blot 或 ELISA：检测标志蛋白表达

目的：确认是否表达外泌体特异性蛋白，排除细胞碎片或其他污染物

典型外泌体标志物：

• 膜蛋白：CD9、CD63、CD81（tetraspanins家族）

• 内膜蛋白：TSG101、ALIX

• 阴性对照：Calnexin（内质网蛋白，应在外泌体中缺失）

检测方式可选择 Western blot 或 ELISA，其中 WB 操作相对通用，能提供相对表达量信息，而 ELISA 更适合高通量检测。

4、荧光染料/流式细胞术：评估膜通透性与完整性

外泌体的功能依赖于膜结构的封闭性与完整性。若其膜发生破裂，不仅会影响内容物稳定性，也会干扰细胞摄取及信号转导功能。

常用策略包括：

• PKH26/PKH67染料：标记脂质双层，观察其膜结构分布及稳定性

• Annexin V结合实验：检测膜上暴露的磷脂酰丝氨酸，用于识别膜破裂或早期凋亡囊泡

• 流式细胞术联合抗体标记：可区分完整外泌体与碎片，支持半定量分析

这些方法适用于功能验证前的快速质控，尤其适合大样本筛选项目。

三、延伸：外泌体完整性与质谱分析的关系

外泌体完整性不仅关系到结构和标志蛋白表达，更直接影响其组学分析的可信度。在质谱分析中，若外泌体膜结构破裂，将导致胞外污染蛋白混入，干扰蛋白谱图，误导差异分析。尤其在无标记定量（DIA）或标签定量（TMT）中，样本质量直接决定蛋白鉴定深度和重复性。建议在进行质谱之前，严格进行外泌体完整性验证，确保其结构、成分和功能均保持稳定。

四、百泰派克生物科技助力外泌体研究的zhuānyè方案

在外泌体研究领域，百泰派克生物科技已构建起覆盖分离纯化 、 完整性验证、 质谱分析、生信解读的一站式服务平台。我们结合Orbitrap高分辨质谱仪、标准化蛋白质组流程和zhuānyè外泌体项目团队，为客户提供高可信、高重复性的科研支持。

服务亮点包括：

• 支持10 µg低起始量外泌体样本分析

• 免费质控评估外泌体完整性（NTA、WB、TEM等）

• 可按需定制肿瘤免疫、自身免疫、干细胞来源等专项外泌体组学服务

外泌体完整性不仅是一项实验指标，更代表科研严谨态度。只有在确认外泌体结构与功能均保持良好状态的基础上，后续的功能实验、机制研究和组学挖掘才具有可信依据。若您正计划开展外泌体相关课题，欢迎联系百泰派克生物科技技术团队，我们将为您量身打造从样本到数据的整体解决方案。

~~

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.zhuānyè生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标进行表征，百泰派克生物科技可做到检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

https://www.biotech-pack.com/index.html