磷酸化蛋白组学定量方法

磷酸化蛋白组学定量方法，是通过一系列利用质谱技术，对样本中蛋白质磷酸化修饰的位点、丰度和动态变化进行定量分析的实验策略，从而了解在不同生物学条件（如疾病、药物处理、信号刺激）下，蛋白质磷酸化状态的变化。蛋白质磷酸化是细胞信号转导中zuì常见、zuì关键的可逆修饰之一，广泛参与信号转导、细胞周期调控、代谢调节和疾病发生，参与调控几乎所有生理过程，包括代谢、细胞周期、凋亡和免疫反应。异常的磷酸化状态与肿瘤、神经退行性疾病、代谢紊乱等多种疾病密切相关。高灵敏度、可重复的磷酸化蛋白组学定量分析，已成为药物研发和机制研究的核心技术。因为磷酸化肽通常在细胞内丰度极低、容易降解，生物样品的背景蛋白量大，如果没有专门的策略，很难捕捉到这些关键信号。科研人员需要结合富集技术与不同的定量模式来准确测量其变化。而磷酸化蛋白组学定量方法，结合了磷酸化肽富集与不同质谱策略，jīngzhǔn测定样本中磷酸化位点的丰度变化，有助于科研人员解析信号网络、疾病机制及药物作用。

磷酸化蛋白组学定量方法的原理与优缺点

磷酸化蛋白组学常用的定量方法可分为无标记（Label-free）与标记（Label-based）两大类，每类又包含不同技术路线。

1 无标记定量（Label-free , LFQ）、

（1）原理：通过质谱检测到的肽段信号强度（峰面积）或谱图计数比较不同样本间的丰度。

（2）优点：实验流程简单，成本低，样本数量不受限制；易于整合临床队列数据。

（3）局限性：需要严格的质控和批次校正，数据重复性受样品复杂度影响较大。

2代谢标记（SILAC, Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）、

（1）原理：在细胞培养基中加入稳定同位素标记氨基酸，在代谢过程中将标记引入蛋白，实现内源性同位素对照。

（2）优点：样本间误差小，适合细胞模型研究动态磷酸化调控。

（3）局限性：jǐnxiàn于可培养细胞，无法用于临床组织或体液；实验周期长。

3化学标记（TMT/iTRAQ）、

（1）原理：对蛋白酶解肽段进行化学修饰并加上同位素标签，一次可并行分析多达18个样本。

（2）优点：高通量、多样本比较方便，灵敏度和重复性好。

（3）局限性：磷酸化肽丰度低，易出现比值压缩，需要优化富集和MS方法（如MS³）。

4juéduì定量（AQUA/PRM）、

（1）原理：合成同位素标记的标准肽作为内标，通过PRM或SRM测定目标肽的juéduì浓度。

（2）优点：灵敏度高、可溯源，适合药物PK/PD研究或临床生物标志物验证。

（3）局限性：成本较高，适合验证性研究而非大规模筛查。

磷酸化蛋白组学定量方法选择建议

1探索性大规模筛查：推荐LFQ-DIA或TMT，覆盖度高。、

2细胞信号通路研究：SILAC适合动态定量。、

3多中心临床样本或药物开发：PRM/AQUA可提供juéduì定量。、

磷酸化蛋白组学定量不再是少数实验室才能开展的技术。通过合理选择策略、结合高性能质谱平台，科研人员能够快速解析信号网络、发现疾病标志物，推动药物研发。百泰派克生物科技结合多平台质谱和自主优化的磷酸化富集与分析流程，可根据项目需求定制zuì优策略，为科研和企业客户提供从探索到验证的一站式磷酸化蛋白组学服务, 为科研院所和制药企业提供高灵敏度、可重复、可溯源的磷酸化蛋白组学解决方案，助力您的项目从数据到发现加速落地。如果您对我们的服务感兴趣，请随时与我们联系。

百泰派克生物科技特色项目

蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.zhuānyè生物信息学分析，分析更系统准确。

单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标进行表征，百泰派克生物科技可做到检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

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