二硫键是蛋白质中的一个重要结构单元，它是由两个半胱氨酸氨基酸残基中的硫原子在氧化环境下形成的，对于生物活性和功能起着决定性作用。二硫键广泛存在于细胞表面受体、抗体、生长因子、激素、酶等蛋白质中，并且容易被还原或发生错误配对，导致原始多肽或蛋白质的结构和生物学活性受到影响。二硫键定位分析通过确定蛋白质结构中二硫键位置和连接方式可以深入了解蛋白质的结构和功能。在生物药物的制备和研发过程中，错误的二硫键配对可能会导致药物失效，甚至可能有潜在的安全风险，对二硫键进行准确的检测和控制是生物制品表征中必不可少的。
图1 二硫键定位分析原理
液相色谱质谱联用（LC-MS）技术的发展极大提高了检测的灵敏度和准确性，推动了二硫键分析的发展，也在二硫键定位分析中发挥着bùkětìdài的作用。百泰派克生物科技BTP通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证。公司根据二硫键分析原理，结合高效液相色谱仪与高分辨率质谱仪建立了二硫键分析平台，为您提供jīngzhǔn的二硫键定位分析服务，无论链内/链间二硫键、一对/多对二硫键、交叉重叠抑或是错配的二硫键，BTP都可进行高效准确的鉴定。欢迎免费咨询，了解更多详情！
实验仪器
高效液相色谱仪：Easy-nLC 1200 （Thermo Fisher Scientific）
高分辨质谱仪：Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ MassSpectrometer（Thermo Fisher Scientific）
案例示意
液相色谱质谱联用法定位二硫键，不进行还原处理，而是直接进行烷基化，这个步骤将游离的巯基封闭。随后，进行酶切操作，将蛋白质分子切割成小片段。在这个过程中，存在二硫键的半胱氨酸之间形成了特定的连接，导致分子量发生变化。通过质谱仪采集数据，并使用相应的分析软件进行数据库匹配，从而得到二硫键的信息。
表1 二硫键分析
Site：形成二硫键的半胱氨酸在蛋白中的位置；Enzyme：酶解蛋白所用的酶；Peptide：肽段序列；PeptideMass：肽段分子量；MassError(ppm)：肽段的质量偏差
图2 肽段二级图
常见问题
问题1：质谱法鉴定二硫键的优势是什么？
回答：质谱法在鉴定二硫键方面具有多个优势。它不仅可以确定二硫键的存在与数量，还能确定二硫键的具体位置和相对含量，提供了更详细的信息。质谱法具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以准确地检测和定量二硫键，在低浓度下也能获得可靠的结果。质谱法所需的样品消耗量相对较少，对于宝贵或有限的样品而言具有重要意义。质谱法在二硫键分析中被广泛应用，为研究蛋白质结构和功能提供了有力的支持。
问题2：为什么要进行烷基化？
回答：进行烷基化是为了封闭游离巯基，防止实验过程中二硫键发生错配。在质谱分析中，样品的制备过程需要进行特殊处理，其中包括烷基化步骤。烷基化是通过将烷基化试剂与巯基反应，使巯基被烷基取代，形成烷基硫醇。这样可以有效地阻止巯基之间的反应，避免在实验过程中形成不正常的二硫键连接或错配。通过烷基化处理，可以确保在质谱分析中得到准确而可靠的二硫键信息，有助于揭示蛋白质的结构和功能特征。
中/英文项目报告
在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括： 1. 实验步骤（中英文） 2. 相关的质谱参数（中英文）3. 二硫键定位分析详细信息 4. 质谱图片 5. 原始数据
二硫键定位分析一站式服务
您只需下单-寄送样品 百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
相关服务
生物药二硫键/游离半胱氨酸检测
蛋白二硫键鉴定和定量分析
生物药糖谱检测
生物药糖基化位点检测
翻译后修饰蛋白组分析
磷酸化定量蛋白组学研究
乙酰化定量蛋白组研究
泛素化定量蛋白组学研究
糖基化定量蛋白组学研究
其他服务项目
优质检测平台
（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台
该平台配备了Agilent 2100生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:
（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台
该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo ScientificExploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;
（3）生物药物表征平台
该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:
（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台
该平台能够完成基于10xGenomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;
（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台
采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single CellAnalysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;
（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台
基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;
（7）生信云平台
基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。
百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。
1.公司采用ISO9001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；
2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；
3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；
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