Far-Western Blot技术的整体工作流程与Western Blot相似，只是WesternBlot中探测目标蛋白质需要抗体，而Far-WesternBlot分析中不需要抗体，而是使用经过纯化和标记的“诱饵”蛋白来探测和检测膜上的目标蛋白。在WesternBlot和Far-Western Blot中，蛋白质都是通过SDS凝胶和nativePAGE凝胶对样品进行分离，然后将蛋白质从凝胶转移到膜上。转模后，用BSA进行封闭。在膜上对蛋白质进行变性和复性，及后续的检测步骤。Far-WesternBlot技术用商业化的高度纯化的诱饵蛋白将膜标记上探针。在诱饵蛋白与目标蛋白反应后，根据所使用的诱饵蛋白，可以检测到与该目标蛋白相对应的条带。
为了鉴定与给定蛋白相互作用的蛋白，Far-Western Blot是一个实验成本低、灵敏度高的有效平台。远westernblotting的原理是对westernblotting的改进，以自然折叠的重组蛋白作为第一个探针，与转染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-WesternBlot使用的第二个探针是针对给定蛋白的特异性抗体，而酶标的第三个探针是针对第二个探针的抗体。当与LC-MS-MS蛋白鉴定相结合时，可以对得到的蛋白斑点(或蛋白条带)进行表征，然后进行进一步的功能分析，如蛋白免疫沉淀等。
Far-WesternBlot分析时，当需要保留蛋白质的天然构象和天然相互作用时需要注意以下问题：1）变性条件下在SDS凝胶中分离的蛋白质可能会发生变性，而变性蛋白可能不会与诱饵蛋白发生反应，从而导致无法识别出相互作用。2）在结合之前将蛋白质变性并复性，也可能导致蛋白质发生构象变化，从而影响靶蛋白与诱饵蛋白的结合。3）如果结合位点受其它因素影响，失去与诱饵蛋白的结合能力，使诱饵蛋白无法与之反应，也可能导致相互作用检测失败。更棘手的是，以非天然构象呈现的蛋白质可能以新的非天然方式发生相互作用，导致检测假阳性。
百泰派克生物科技提供Far-WesternBlot分析服务，可以根据您的需求定制实验，并对可能影响结果的潜在因素进行评估。我们承诺给出的数据可靠，且可重复性高。
Far-Western Blot分析
Far-Western Blot分析的优势
• 可用于体外蛋白质相互作用研究
• 分析蛋白的结合域
• 比较蛋白质结合的亲和力
• 无需特异性抗体
Far-Western Blot分析的工作流程
1-. 定量蛋白质，并通过SDS或native PAGE分离
2. 将蛋白质从凝胶转移到膜上
3. 将蛋白质进行变性和复性，以保证膜上的蛋白质结合位点充分暴露
4. BSA缓冲液对膜进行封闭
5. 将膜与纯化的诱饵蛋白进行孵育
6. 检测诱饵蛋白信号
7. 图像分析及报告交付
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北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd.简称BTP）从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质（包括蛋白质、多肽、代谢物）质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务，业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台，服务3000+企业，10000+客户的选择，致力于为您提供y_ō_u|z_h_ì的生物质谱分析服务!