获得高质量的抗原是抗体开发能否成功的关键因素之一,义翘神州可以提供蛋白抗原及多肽抗原制备服务。蛋白抗原拥有更完整的构象,当待检样品中蛋白处于天然构象时,优先选择蛋白抗原免疫,例如中和抗体的开发等。在全长蛋白表达有困难或有其它特殊检测特异性要求的情况下,多肽抗原是经济实用的选择。义翘神州还可以提供DNA、细胞、昆虫病毒等多样化免疫手段,以解决蛋白抗原难以重组表达的问题。
从抗原来源分,抗原可大致分为:天然抗原、重组抗原、合成抗原和小分子抗原等。
1、天然抗原:一般采用物理和化学方法裂解组织或细胞,再从组织或细胞裂解液中提取、纯化天然抗原。此种方法获得的抗原容易保持蛋白(抗原)的构象和天然修饰(磷酸化、甲基化、糖基化等),纯化难度和成本相对较大。
2、重组抗原:基因工程技术使得研究者能轻易地克隆特定蛋白,并能批量化生产纯度较高地蛋白,能大量生产少见的天然抗原(比如基因突变导致的蛋白质中氨基酸改变),并能给特定蛋白添加标签(Flag、6×His、Myc等),重组抗原的构象和修饰不如天然抗原。
3、合成抗原:体外方法合成的抗原,多用于小分子蛋白质或多肽抗原的制备,一般用于上述2中方法难以获得的抗原。
不管是何种来源的抗原,抗原能够免疫B细胞产生抗体需满足以下几个条件:分子量足够大、外源性强、结构尽量复杂和可降解性好。与抗体特性密切相关的是抗原所具有的抗原决定簇:如抗原决定簇包含特定的蛋白修饰,则其免疫产生的抗体能用来检测特定修饰的蛋白;如果免疫抗原为免疫球蛋白(或免疫球蛋白特定多肽链),则抗体能结合所有的免疫球蛋白,二抗的制备即是原理。
义翘神州——抗原制备服务优势:
1、蛋白表达纯化平台
包括基因合成、蛋白表达纯化以及蛋白鉴定。
2、节省更多的成本和预算。
3、专有的多肽设计软件
选择识别区域刺激动物产生免疫反应。
4、高效率的偶联方案
保证设计的多肽免疫成功率大于95%。
抗原制备注意事项:
(1)序列上的外源性
设计的多肽序列不能在被免疫的动物体内存在相同的序列,否则你的多肽的部分很难引起免疫反应。关于同源性,可以用Blast去查一下。
(2)亲水性
蛋白质总是倾向于将亲水部分暴露在外而将疏水部分隐藏在内部,设计的多肽应该尽量亲水以便更好地引发免疫反应。DNassist,GCG,ProtScale等软件都可以对多肽序列的亲水性进行预测,关于软件的使用请大家自己学习。
(3)N端与C端的选择
一般来说末端的肽段比中间的肽段好(暴露充分),对于膜蛋白来说,C端疏水性比较强,宜选择N端。
(4)氨基酸的各类
序列中不能含有太多的Pro(脯氨酸),一般可以含有1-2个Pro。尽量包含MHCⅡ类分子偏好的氨基酸Asp,Tyr,Phe,避免容易发生糖基化和磷酸化的位点的氨基酸。
(5)为了偶联载体,通常需要多加一个氨基酸作为“桥”,目前用得比较多的是Cys,它应该加在对抗体产生不重要的那一端。
(6)多肽的长度
为了能够达到一个表位的跨度,设计的多肽不能少于6个氨基酸,通常的要求是8-20个氨基酸,如果设计的多肽太长则可能会形成二级结构,合成多肽的成本也比较高。关于多肽与载体的偶联请点击这里查看。
不管是哪一种方式的抗原,纯度都是越高越好,纯度越高,非目的性的免疫反应就小,目的抗体在抗血清中占的比例也就越高。需要注意的是,作为抗原,不能有太强的毒性,否则动物会死亡。通常在抗原制备中经常会用到去垢剂,免疫动物之前必须确保不含去垢剂,否则很容易引起动物死亡的,尤其是采用静脉加强免疫时,很低浓度的去垢剂就能引起动物的死亡。
来源:蛋白抗原制备和多肽定制服务:https://cn.sinobiological.com/services/antigen-preparation-services