义翘神州抗原制备服务及注意事项

获得高质量的抗原是抗体开发能否成功的关键因素之一，义翘神州可以提供蛋白抗原及多肽抗原制备服务。蛋白抗原拥有更完整的构象，当待检样品中蛋白处于天然构象时，优先选择蛋白抗原免疫，例如中和抗体的开发等。在全长蛋白表达有困难或有其它特殊检测特异性要求的情况下，多肽抗原是经济实用的选择。义翘神州还可以提供DNA、细胞、昆虫病毒等多样化免疫手段，以解决蛋白抗原难以重组表达的问题。

从抗原来源分，抗原可大致分为：天然抗原、重组抗原、合成抗原和小分子抗原等。

1、天然抗原：一般采用物理和化学方法裂解组织或细胞，再从组织或细胞裂解液中提取、纯化天然抗原。此种方法获得的抗原容易保持蛋白（抗原）的构象和天然修饰（磷酸化、甲基化、糖基化等），纯化难度和成本相对较大。

2、重组抗原：基因工程技术使得研究者能轻易地克隆特定蛋白，并能批量化生产纯度较高地蛋白，能大量生产少见的天然抗原（比如基因突变导致的蛋白质中氨基酸改变），并能给特定蛋白添加标签（Flag、6×His、Myc等），重组抗原的构象和修饰不如天然抗原。

3、合成抗原：体外方法合成的抗原，多用于小分子蛋白质或多肽抗原的制备，一般用于上述2中方法难以获得的抗原。

不管是何种来源的抗原，抗原能够免疫B细胞产生抗体需满足以下几个条件：分子量足够大、外源性强、结构尽量复杂和可降解性好。与抗体特性密切相关的是抗原所具有的抗原决定簇：如抗原决定簇包含特定的蛋白修饰，则其免疫产生的抗体能用来检测特定修饰的蛋白；如果免疫抗原为免疫球蛋白（或免疫球蛋白特定多肽链），则抗体能结合所有的免疫球蛋白，二抗的制备即是原理。

义翘神州——抗原制备服务优势：

1、蛋白表达纯化平台

包括基因合成、蛋白表达纯化以及蛋白鉴定。

2、节省更多的成本和预算。

3、专有的多肽设计软件

选择识别区域刺激动物产生免疫反应。

4、高效率的偶联方案

保证设计的多肽免疫成功率大于95%。

抗原制备注意事项：

（1）序列上的外源性

设计的多肽序列不能在被免疫的动物体内存在相同的序列，否则你的多肽的部分很难引起免疫反应。关于同源性，可以用Blast去查一下。

（2）亲水性

蛋白质总是倾向于将亲水部分暴露在外而将疏水部分隐藏在内部，设计的多肽应该尽量亲水以便更好地引发免疫反应。DNassist，GCG，ProtScale等软件都可以对多肽序列的亲水性进行预测，关于软件的使用请大家自己学习。

（3）N端与C端的选择

一般来说末端的肽段比中间的肽段好（暴露充分），对于膜蛋白来说，C端疏水性比较强，宜选择N端。

（4）氨基酸的各类

序列中不能含有太多的Pro（脯氨酸),一般可以含有1-2个Pro。尽量包含MHCⅡ类分子偏好的氨基酸Asp，Tyr，Phe，避免容易发生糖基化和磷酸化的位点的氨基酸。

（5）为了偶联载体，通常需要多加一个氨基酸作为“桥”，目前用得比较多的是Cys，它应该加在对抗体产生不重要的那一端。

（6）多肽的长度

为了能够达到一个表位的跨度，设计的多肽不能少于6个氨基酸，通常的要求是8-20个氨基酸，如果设计的多肽太长则可能会形成二级结构，合成多肽的成本也比较高。关于多肽与载体的偶联请点击这里查看。

不管是哪一种方式的抗原，纯度都是越高越好，纯度越高，非目的性的免疫反应就小，目的抗体在抗血清中占的比例也就越高。需要注意的是，作为抗原，不能有太强的毒性，否则动物会死亡。通常在抗原制备中经常会用到去垢剂，免疫动物之前必须确保不含去垢剂，否则很容易引起动物死亡的，尤其是采用静脉加强免疫时，很低浓度的去垢剂就能引起动物的死亡。

来源：蛋白抗原制备和多肽定制服务：https://cn.sinobiological.com/services/antigen-preparation-services