德国LONZA Amaxa核转染系统

简介：Nucleofector核转染技术

随着系统生物学与交叉学科方法的应用，要求细胞和系统 模型越来越接近体内细胞的功能。这就意味着将来的细胞转染多数会是原代细胞的转染。而传统的方法很难成功转 染原代细胞。使用细胞系做为系统模型，传统的方法也难重复出好的转染效率与成活率。Nucleofector 技术就从根本上解决这个问题。无论是原代细胞、干细胞还是细胞系，它每次都可重复出很高的转染效率。1998年，Nucleofector技术开发成功，2001年上市，是市场有效的、非病毒介导的、用于原代细胞与难转染细胞系的转染方法。现在Lonza还在继续不断改革创新，为研 究者推出更多更好的新产品。

原理：

NucleofectionTM技术是利用电击在细胞膜上穿个小孔。并且综合优化了各种特定细胞转染程序与转染液，使得转染物质 （如DNA、RNA等）不仅可以进入细胞质，可直接通过核膜进入细胞核。这使得细胞的转染效率Zui高可达99%。

Nucleofector技术的组成：

Nucleofector技术由Nucleofector仪器、细胞转染试剂和操作 手册组成

※ Nucleofector仪器：

1. 模块化设计，各模块可单独配置；

2. 核心模块内置各种细胞优化的电极参数，可直接选择；

3. X模块提供中低通量(1-16样)，中低细胞数量(约1e+5 到1e+7)转染；

4. Y模块提供24孔板直接贴壁转染；

5. 96模块提供高通量(96样)，低细胞数量(约1e+5)转染；

6. LV模块提供低通量，大量细胞直接转染 (1e+8到1e+9)；

※ 试剂盒：包含有转染溶液、添加剂、专用电极杯、吸管、 阳性对照质粒。转染试剂为细胞转染提供保护，即保证了高的转染效率与成活率，又帮助细胞维持良好的生理功能 性状。我们提供有一系列的优化转染试剂盒与操作手册。

※ 数据库与操作手册：我们的在线数据库提供600种以上细胞 的转染数据和操作手册。优化的操作手册除了操作手册除了操作指导外，还包括细胞来源、传代、生长条件、培养基以 及转染后培养等细节技巧。

Zui具兼容性的模块：Nucleofector X模块

针对不同数量级的细胞，提供不同的电极杯。

X模块可以使用两种不同形式的聚合材料电极，分别是如下 电极杯和电极板条

100ul电极杯

※ 新式可导电材料的电极杯替代了原来铝制电极杯

※ 低通量一次可转较大量的细胞 (适用于生化应用或Western Blot实验)

16孔20ul电极板条

※ 与96孔电极杯的板条一致

※ 中通量，低细胞数量（报告基因分析，RNAi）

可在相同的条件下转不同数量的细胞

X模块使用的相同材质制成的20ul电极板条与100ul电极杯，X模块中不同的电极模式可选用相同的电转程序(系统可自动转化应用于不同模块的参数，客户无需进行额 外操作)，实现实验的方便性与灵活性Zui大化。一旦其中一种电极形式优化好，另一种就很容易转化好。不同通量的电转条件也很容易转化。 96孔模块的操作手册也适用于X模块。

贴壁转染模块 4D-Nucleofector Y Unit

至今为止基于电转的方法都是要求细胞处于悬浮状态 Nucleofector进入一个新时代，细胞可以在贴壁状态下直接转染。细胞培养在24孔板中，插入电极板即可 完成转染。

优点：

※ 细胞生长在24孔板中，直接转染

※ 可在细胞生长的任何时期进行转染

※ 细胞活力好，转染效率Zui高可达70%

※ 与Clonetics原代动物神经元兼容

耗材：

根据简化试剂盒的原则，我们提供两种转染试剂AD1与AD2，适用于所有细胞类型。试剂盒可按下图的指示进行选择：

大量细胞转染：LV模块

使用4D-Nucleofector核转系统，用于小量细胞转染的实验条件，可直接放大，用于大量细胞的转染。 

LV模块采用封闭系统，可转染1×107至1×109细胞。转染的条件可使用X模块，以小体积进行摸索。之后再使用LV模块，不需要重新优化，即可进行大量细胞转染。LONZA公司已进行过验证的细胞有人T细胞、CHO-S、HEK293-S和K562等。 

优势： 

※ 系统封闭 

※ 在无菌环境下转染多达109细胞； 

※ 系统可放大 

※ 可用小体积优化并确定转染条件； 

※ 详细的操作步骤 

※ 在线数据库中收录了700多种细胞的实验条件； 

※ 操作简单 

※ 简单的培训即可掌握实验技术； 

※ 软件系统 

※ 操作软件符合21CFR part11的规定；

两种规格可选：

从小体积少量细胞直接放大到大体积大量细胞

应用：

※ 对人原代细胞进行体外基因修饰以用于细胞治疗（例如，基因编辑、生产CAR-T细胞）；

※ 瞬时转染后生产治疗性蛋白或抗体，进行各种质粒的筛选；

※ 瞬时转染大量细胞后用于细胞学实验；

96孔模块

96孔模块可对原代细胞和各种细胞系提供1-96通量的实验条件。可设置96个不同的实验条件。完整的系统包含3个部分：

※ 4D核转仪(Core+X模块)来发送核转程序

※ 96-well Shuttle Device来进行96孔的核转

※ 安装96-well Shuttle Device软件的电脑， 用来控制仪器

※ 用于原代细胞和各种细胞系的专用试剂盒

※ 对于未知条件的细胞提供优化试剂盒

优点：

※ 96个转染孔可单独设置转染程序，完成全部核转 只需不到5分钟

※ 一次核转，实验96个不同条件，完成条件优化 订购

基本款：Nucleofector 2b Device

2001年推出，用于实验室研究的单管系统，低通量 有效转染质粒、RNA等不同底物到原代细胞和难转染细胞系中。拥有4000篇以上的引用文献。

※ 提供50多种原代细胞，血液细胞及干细胞试剂盒

※ 5种细胞系试剂盒涵盖了所有种类细胞系

※ cGMP试剂盒适用于蛋白生产应用

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