高效富集磷酸肽的五种策略比较（IMAC/TiO₂等）

蛋酸化作为zuì常见的翻译后修饰之一，在信号转导、细胞周期、凋亡等生物过程中发挥核心作用。由于磷酸肽在复杂蛋白组中通常丰度极低（<1%），直接进行LC-MS/MS分析难以实现全面覆盖。在质谱分析前进行有效的磷酸肽富集成为揭示磷酸化修饰网络的关键步骤。

一、IMAC（Immobilized Metal Affinity Chromatography）

1、原理与机制

IMAC利用固定化的金属离子（如Fe³⁺、Ga³⁺）与磷酸基团间的静电作用选择性结合磷酸肽。

2、优点

• 对多磷酸肽富集效率高；

• 方法成熟，兼容多种前处理流程；

• 可反复使用，成本较低。

3、缺点

• 易共富集含酸性氨基酸（如Asp/Glu）肽段，降低特异性；

• 对单磷酸肽选择性略低。

二、TiO₂（Titanium Dioxide Chromatography）

1、原理与机制

TiO₂表面具有亲磷酸性质，通过Lewis酸-碱相互作用选择性结合磷酸肽。

2、优点

• 特异性较高，尤其适合低丰度磷酸肽富集；

• 操作简便，适配多种Buffer体系。

3、缺点

• 容易共富集带负电的非磷酸肽（如含酸性多肽）；

• 富集偏好单磷酸肽，多磷酸肽可能洗脱不完全。

三、ZrO₂（Zirconium Dioxide Chromatography）

1、原理与机制

ZrO₂同样作为Lewis酸载体，但对磷酸基团具有更强亲和力，尤其适合中性pH条件下操作。

2、优点

• 较TiO₂更能避免酸性肽段共富集；

• 对多磷酸肽的保留能力优于TiO₂。

3、缺点

• 价格相对较高，工业化规模使用受限；

• 富集条件对缓冲液成分更为敏感。

四、MOAC（Metal Oxide Affinity Chromatography）

1、原理与机制

MOAC为一种广义术语，包含TiO₂、ZrO₂等多种金属氧化物载体，依靠磷酸基团与金属中心的相互作用实现选择性富集。

2、优点

• 可根据研究目标灵活选择材料；

• 与IMAC互补，适合串联富集策略。

3、缺点

• 不同氧化物对样本类型敏感性不同，需优化条件；

• 依赖材料稳定性和批间一致性。

五、抗磷酸化抗体亲和富集（Phospho-specific Antibody Enrichment）

1、原理与机制

使用针对特定位点或修饰形式（如p-Tyr, p-Ser, p-Thr）的单克隆或多克隆抗体，通过免疫富集捕获磷酸化肽段。

2、优点

• 高度特异，适用于目标位点研究；

• 可实现位点水平的定量与追踪。

3、缺点

• 成本高昂；

• 无法全面覆盖未知磷酸化位点；

• 抗体批间差异大，影响可重复性。

六、对比表

七、百泰派克生物科技在磷酸肽研究中的优势

在磷酸化蛋白组学研究中，百泰派克生物科技基于高分辨率Orbitrap质谱平台，配合自主优化的IMAC-TiO₂串联富集策略，可实现：

• 磷酸肽覆盖率提升30%+；

• 单次分析检测磷酸化位点高达10,000+；

• jīngquè区分Ser/Thr/Tyr修饰，支持定量分析；

• 提供多物种、多组织样本支持（人、小鼠、植物等）。

磷酸肽富集的策略多样且各有千秋。科研人员应根据研究目标、样本类型及预算进行合理选择。百泰派克生物科技始终致力于将前沿技术转化为高效科研工具，助力您jīngzhǔn解析磷酸化调控机制。

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百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.zhuānyè生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标进行表征，百泰派克生物科技可做到检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

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6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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