检测方法
1、酶联免疫吸附(ELISA)法
ELISA法是蛋白含量检测使用广泛的方法,原理是基于抗原抗体的免疫反应,结合酶的高效催化对信号进行级联放大,从而对待测物进行定性或定量分析的方法,具有高特异性和高灵敏度的优势。ELISA法适用于宿主蛋白质和ProteinA的残留检测以及其他有商品化ELISA试剂盒的蛋白成分检测。
2、考马斯亮蓝(Bradford)法
Bradford法是中国药典收录的蛋白质含量测定法中的第五法,原理是在酸性溶液中考马斯亮蓝G250与蛋白质分子中的碱性氨基酸(精氨酸)和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物,从而对蛋白质的含量进行定量分析。Bradford法是一种通用型的检测方法,适用于发酵或酶法工艺来源的化药中总蛋白残留检测。
3、LC-MS/MS法
基于LC-MS/MS的特征肽段法检测蛋白含量是ELISA法的补充,相较于ELISA法具有更好的特异性,且不受特异性的抗体等关键试剂的限制。
原理是采用酶解后的特征肽段作为替代监测整体蛋白的含量。实验流程如下所示:
1) 根据蛋白的理论序列筛选用于定量的特征肽段;
2)建立特征肽段的液质方法;
3)样品经蛋白酶酶解;
4)酶解后的样品经质谱检测,从而定量样品中蛋白的含量。
检测标准
1、T/QGCML 1839-2023 丝素蛋白膜碳酸钠残留测试技术规范
2、T/DYZL 006-2019 乳免疫蛋白粉 α-乳白蛋白
3、SN/T 5094-2018 出口禽蛋及蛋制品中氟虫腈残留量的测定液相色谱-质谱法