硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素,对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用。它们作用于微生物酶系统,抑制乙酰辅酶A,干扰微生物糖类的代谢,从而起抑菌作用。硝基呋喃类药物曾广泛应用于畜禽及水产养殖业,以治疗由大肠杆菌或沙门氏菌所引起的肠炎、疥疮、赤鳍病、溃疡病等。由于硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎副作用,中国卫生部于2010年3月22日将硝基呋喃类药物呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林列入可能违法添加的非食用物质黑名单。
关于硝基呋喃,北京清析技术研究院可提供硝基呋喃类药物残留检测等检测项目。北京清析技术研究院可对禽畜肉及其副产品(如骨头、内脏等)、肉类制品(如香肠、火腿等)、水产及其制品(如虾、鱼等)、奶及奶制品、蛋及蛋制品、饲料及原料、水体、土壤、农产品及其制品(如果蔬、茶叶等)、其他相关样品(如血清、毛发、泥土等)等进行硝基呋喃的检测。
检测方法
硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速,无法检测。但其代谢产物因和蛋白质结合而保证长时间稳定存在。一般以硝基呋喃类药物代谢物为目标分析物的检测,来达到检测硝基呋喃类药物残留量的目的。
(1)检测前处理
在检测前一般需要对样品进行处理,一般分为洗涤、水解和衍生化及净化等处理步骤,下面以国家标准检测方法(GB/T20752-2006)和行业标准方法(SN/T1627-2005)为例介绍一下检测前处理的一般步骤。
1、洗涤
GB/T20752-2006:2g均质好的样品,15ml的甲醇-水(2+1),混匀1min,4000rmp离心,弃掉上清液。
SN/T 1627-2005:1g组织,不用洗涤。
2、水解和衍生化
GB/T20752-2006:加入20ml0.2M盐酸,加入0.3ml的衍生化试剂(75mg 2-硝基苯甲醛溶于10ml二甲基亚砜,0.05M),37℃避光振荡16h。
SN/T 1627-2005:加入30ml0.125M盐酸,加入1ml的衍生化试剂(100mg 2-硝基苯甲醛溶于12.5ml二甲基亚砜),37℃避光振荡16h。
3、净化
GB/T20752-2006:加入5ml0.1M的磷酸氢二钾,并用1M氢氧化钠调pH到7.4,离心上清液过HLB柱,5ml乙酸乙酯洗脱,40 ℃吹干,定容到1ml(10ml乙腈+0.3ml,用水定容到100ml)
SN/T 1627-2005:加入4ml1M的氢氧化钠,并用1M盐酸和0.1M氢氧化钠调pH到7-7.5,3000rmp离心10min,上清液倒入250ml的分液漏斗中,残渣用5ml水洗,3000rmp离心10min,上清液也倒入250ml的分液漏斗中,加乙酸乙酯40ml,振摇1ml,静置3min,重复提取1次,合并乙酸乙酯,通过装无水硫酸钠的漏斗过滤至鸡心瓶中,50℃ 旋蒸至3-5ml,再转移到试管中, 50 ℃ 吹干,定容至1ml(0.1%乙酸:乙腈:甲醇 3:3:2)。
(2)检测方法
经过对样品检测前的处理后,就可以对样品中的硝基呋喃类药物代谢物残留量进行检测,有关猪肉、禽肉、水产品中硝基呋喃类药物代谢残留量测定的方法,国家有相应的检测标准,也有相关的行业标准,文献报道也有一些检测方法。国家和行业标准检测方法基本是液相色谱法或液相色谱-串联质谱法,区别在于提取溶液和净化方法上有差异,以及外标法或内标法定量的不同,检出限大多为0.5μg/kg。文献报道有固相萃取液相色谱-质谱法和液相色谱-串联质谱组合法,其中前者与国家、行业标准检测方法的检出限相同,后者检出限能达到0.03μg/kg。
检测标准
1、DB15/T 2130-2021 土壤中硝基呋喃类药物残留量的测定高效液相色谱法
2、DB34/T 3650-2020 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定酶联免疫吸附法
3、DB34/T 2253-2014 水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测胶体金免疫层析法
4、DB37/T 1779-2011 水产苗种中硝基呋喃类原药残留量的测定液相色谱-串联质谱法
5、KJ 201705水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法
6、SB/T 10927-2012 动物组织中硝基呋喃类代谢物残留的测定酶联免疫吸附法
7、GB/T 39670-2020 宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
8、DB12/T 865-2019 水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱串联质谱法
9、T/ZNZ 160-2023 水产品中四种硝基呋喃类代谢物的快速 检测胶体金免疫层析法