蛋白质翻译后修饰相关问题解答

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1-. 在蛋白质中磷酸化位点分析时应该注意些什么问题？

覆盖率：覆盖率越高，检测和鉴定含有修饰基团的肽几率就越大。

修饰位点的占有率：被修饰的蛋白质的百分比低，则检测到修饰肽的机会会随之减少。如果百分比较高（>30％），则有助于识别修饰位点。

2. 如何增加覆盖范围以定位磷酸化或甲基化位点？

请注意，由于蛋白质序列的独特性，每种蛋白质在高序列覆盖率下都有不同的定位潜力。

蛋白质的覆盖率可通过以下方式增加：

a）有数量相对较多的蛋白质（Z_U_I好> 5μg蛋白质）用于质谱分析；

b）确保蛋白质是高纯度的；

c）可通过使用多种质谱仪器/技术进行分析；

d）可使用TiO2柱对磷酸化蛋白进行富集

3. 糖基化位点会抑制蛋白质样品的鉴定吗？

在蛋白质的纯度和浓度很高的情况下，基于质谱的蛋白质鉴定仍然是Z_U_I佳选择。糖链（CHO）会通过以下机制破坏基于质谱的鉴定：

a）糖链可阻断胰蛋白酶裂解；

b）多变的糖链分子量，会降低对糖肽的检测；

c）解决方式：在凝胶上样和质谱分析之前，用N-聚糖酶（如PNGaseF）对N-linked糖链进行水解。

4. 我想对蛋白质中潜在的磷酸化位点进行初步分析。您公司费用Z_U_I低的先关服务是什么？有哪些限制？您有合适的建议吗？

我们成本Z_U_I低的初步分析是对来自凝胶或高纯度制剂的纯蛋白质使用MALDI-TOF/TOF的方法进行分析。

局限性：如果蛋白质很大，蛋白质不纯或产量低（<500 ng），蛋白质的覆盖率也会很低。

建议：如果能够提供高质量的样品，可大大降低初步分析的成本。（详情请咨询）

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