基于SDS-PAGE的蛋白分离

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE）在蛋白表达分析等科研工作中经常用到。可用于获取蛋白质样品的电泳图谱，结合其它基于质谱的蛋白质鉴定服务对样品进行分析或纯化，用于复杂生物样品的蛋白质谱分析。

百泰派克生物科技可根据您的需求，提供基于1D SDS-PAGE或2DSDS-PAGE的蛋白分离服务：基于我司优化的标准操作流程，使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统进行1DSDS-PAGE蛋白质分离。将蛋白样品（5-20 ug）用上样缓冲液稀释到一定浓度并加热（沸水浴5min），根据样品的分析目的选择适当浓度的凝胶并将样品上样到凝胶孔中，加入电泳缓冲液，在80V电压下恒压分离15min，在120V电压下恒压分离60 min。分离后卸下胶板，将凝胶用考马斯亮蓝染色或银染染色。

2D SDS-PAGE蛋白分离使用IPG (pH3-10)胶进行一维等电点聚焦，SDS-PAGE胶二维电泳进行Mw分离，实现蛋白分离。样品使用超滤管进行纯化，并将溶液体系替换为2Dlysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 Mthiourea and 4%CHAPS)进行等电点聚焦。聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上，挤去多余水分、矿物油及多余样品，用缓冲液溶胀15min后，将胶条继续在平衡缓冲液中平衡15min。将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上，使用低熔点琼脂糖封胶后，将凝胶转移至电泳槽中，起始使用低电压，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，加大电压，待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。卸下胶板，将凝胶用考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色。使用TyphoonTRIO (GE Healthcare)对胶图进行扫描，扫描得到的胶图通过Image Quant software (version6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)进行分析。

百泰派克2D SDS-PAGE示例

关于样品：

1-. 液体或固体样品均可；

2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30 µg蛋白，2D SDS-PAGE一般需要50-1000 µg蛋白；

3. 考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色的蛋白质均可。

百泰派克生物科技-您身边的生物质谱专家
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Biotech Pack Scientific Co., Ltd.简称BTP）从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质（包括蛋白质、多肽、代谢物）质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务，业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台，服务3000+企业，10000+客户的选择，致力于为您提供y_ō_u|z_h_ì的生物质谱分析服务!