十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)在蛋白表达分析等科研工作中经常用到。可用于获取蛋白质样品的电泳图谱,结合其它基于质谱的蛋白质鉴定服务对样品进行分析或纯化,用于复杂生物样品的蛋白质谱分析。
百泰派克生物科技可根据您的需求,提供基于1D SDS-PAGE或2DSDS-PAGE的蛋白分离服务:基于我司优化的标准操作流程,使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统进行1DSDS-PAGE蛋白质分离。将蛋白样品(5-20 ug)用上样缓冲液稀释到一定浓度并加热(沸水浴5min),根据样品的分析目的选择适当浓度的凝胶并将样品上样到凝胶孔中,加入电泳缓冲液,在80V电压下恒压分离15min,在120V电压下恒压分离60 min。分离后卸下胶板,将凝胶用考马斯亮蓝染色或银染染色。
2D SDS-PAGE蛋白分离使用IPG (pH3-10)胶进行一维等电点聚焦,SDS-PAGE胶二维电泳进行Mw分离,实现蛋白分离。样品使用超滤管进行纯化,并将溶液体系替换为2Dlysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 Mthiourea and 4%CHAPS)进行等电点聚焦。聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上,挤去多余水分、矿物油及多余样品,用缓冲液溶胀15min后,将胶条继续在平衡缓冲液中平衡15min。将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上,使用低熔点琼脂糖封胶后,将凝胶转移至电泳槽中,起始使用低电压,待样品在完全走出IPG胶条,浓缩成一条线后,加大电压,待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。卸下胶板,将凝胶用考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色。使用TyphoonTRIO (GE Healthcare)对胶图进行扫描,扫描得到的胶图通过Image Quant software (version6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)进行分析。
百泰派克2D SDS-PAGE示例
关于样品:
1-. 液体或固体样品均可;
2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30 µg蛋白,2D SDS-PAGE一般需要50-1000 µg蛋白;
3. 考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色的蛋白质均可。
百泰派克生物科技-您身边的生物质谱专家
北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Biotech Pack Scientific Co., Ltd.简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征,大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系,专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务,业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台,服务3000+企业,10000+客户的选择,致力于为您提供y_ō_u|z_h_ì的生物质谱分析服务!