蛋白样品鉴定过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切,鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息,百泰派克公司会选用在蛋白鉴定过程中常用的6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和鉴定,在得到更多的碎裂肽段片段的经过肽段之间的拼接完成蛋白序列****的测定。百泰派克公司应用现有的质谱技术平台,提供以LC-MS/MS为基础的的肽谱图分析,此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂。主要用于蛋白质一级结构的确认,通过使用多种蛋白质酶切反应和液质联用技术对肽段的测序,结合专有的分析软件,能对任何非特异性蛋白酶酶解产物的质谱数据进行分析。从而实现对所测定靶蛋白序列****的覆盖。
质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的流程:
•使用6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N)分别对靶蛋白进行酶切和鉴定
• 接着使用nano LC-MS/MS或者UV LC-MS/MS对样品进行分析
• 将得到的肽段覆盖率/肽谱图全序列与您提供的理论序列进行比对
• 得到比对结果
质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的优点:
(1)特异性及非特异性蛋白质酶的组合,可实现对任何蛋白质(多肽)的鉴定达到****的覆盖率。
(2)每个肽段的确认包括:1)基于样品的质量;2)基于样品的MS/MS指纹图谱,比仅使用一级质谱进行测定更准确。
样品要求:
胶内样品和溶液样品均可以用来进行上述测序
样品纯度越高越好,建议超过80%的蛋白质
需要的靶蛋白样品量:10-20ug
蛋白质胶样品也可用于肽段覆盖率测定,但需对样品进行特殊的前处理。
案例分析:
蛋白样品****序列验证服务
在实际的实验过程中,按照尽量提高效率和降低花费的原则,我们会对客户提供的理论序列进行分析,分析过程是按照几种不同的蛋白酶酶切位点进行肽段覆盖率的预测,假如可以仅仅通过3种蛋白酶酶切就可以****的覆盖全序列,实际实验过程就会先用这3种蛋白酶进行酶切和后续的序列分析实验,这样可以有效的降低实验的成本。以下是之前项目的部分数据,该项目中客户按照理论序列表达抗体药物,一级序列需要进行验证,以证明表达得到的抗体与理论序列一致,部分实验数据展示如下:
结题报告中,我们会按照下图所示的方式给出肽段覆盖率的详细数据。
中/英文项目报告
在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:
1-. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 生物药物肽段覆盖率信息
生物药物肽段覆盖率测定一站式服务
您只需下单-寄送样品
百泰派克一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
百泰派克生物科技-您身边的生物质谱专家
北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Biotech Pack Scientific Co., Ltd.简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征,大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系,专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务,业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台,服务3000+企业,10000+客户的选择,致力于为您提供y_ō_u|z_h_ì的生物质谱分析服务!