恒温扩增试剂盒操作步骤
提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化。鹿荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 uL Abuffer (注意:Abuffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 uLAbuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响);
2.每个反应管分别加入2 uL上游引物、2 uL下游引物和0.6μ探针(引物和探针浓度为10 μM ，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)
恒温快速扩增试剂盒常用酶原料
尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时，可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键，而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解，基础型恒温扩增试剂盒报价，从而失去被当作模板再扩增的能力，恒温扩增试剂盒，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，基础型恒温扩增试剂盒价格，防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能，但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被UDG有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率，基础型恒温扩增试剂盒公司，因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。
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NEAR相关酶
切口酶扩增反应(Nicking Enzyme AmplificationReaction，NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法，详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测？。其使用的酶有两种：切刻内切酶：如Nt.BstNBI切刻内切酶，该类酶不同于常规限制性内切酶，其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口，并暴露出游离的3’端；DNA聚合酶：如Vent(exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。
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