HPLC概述
高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、快速的分析分离技术,是现代分离测试的重要手段。
色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationphase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,高效液相色谱哪家质量好,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的,其以液体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同,但填料更加精细,需高压泵推动,柱效高,分析速度快。
与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程,其组成、比例和pH值可灵活调节,分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性,高效液相色谱报价,从而使不同样品得到分离。
高效液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,高效液相色谱哪个稳定性好,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20%,而80% 则需用高效液相色谱来分析。
高效液相色谱基线漂移的解决方法
(1)控制色谱柱和流动相的温度,高效液相色谱,并在测试前使用热交换器。
(2)采用高效液相色谱级溶剂、高纯度盐和添加剂流动相在使用前脱气,用于在线脱气或氦气脱气。
(3)用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流动槽必要时可使用1N硝酸(不要使用盐酸)
(4)移除障碍物或更换管子。参照检测器手册替换流单元格窗口。
(5)改变比率或速度。为了避免这一问题,可以定期检查流动相的组成和速度。
(6)用中等强度的溶剂冲洗并改变流动相,用10-20倍体积的新流量冲洗相对于分析柱使用离子对试剂和缓冲盐时,应注意平衡柱。
(7)检查流动相的组成采用好的化学试剂和高效液相色谱溶剂8改变分析条件。
(8)使用保护柱,如有必要,定期在样品之间或分析期间用强溶剂冲洗柱。
(9)重置基线。使用了一个新的移动相。
(10)将波长调整到很大吸收波长检测波长的重新选择。
高效液相色谱
高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支,应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20%,而80%则需用高效液相色谱来分析。HPLC具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点,已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
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