荧光定量PCR仪的原理
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为了便于对所检测样本进行比较,在real-timeQ-PCR反应的指数期,需设定一定荧光信号的域值,迷你PCR仪多少钱,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline),荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号,迷你PCR仪公司,它可用于定义样本的域值循环数(Ct)。
荧光定量PCR仪的优势
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样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值(限制点的循环数)。域值应设定在使指数期的扩增效率为较大,这样可以获得准确,可重复性的数据。如果扩增的还有标有相应浓度的标准品,线性回归分析将产生一条标准曲线,可以用来计算未知样品的浓度。
荧光定量PCR仪的相关介绍
PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的终扩增产物,用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。
在real-timeQ-PCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板当初的含量。
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